フサシダ科植物における造精器誘導物質の生合成とその誘導遺伝子の機能の解析

镰刀菌科植物受精器官诱导物质的生物合成及其诱导基因的功能分析

• 批准号: 05276204
• 负责人: 山根 久和
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1993
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1993 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-05276204/
• 关键词: フサシダ科; GA_<73>メチルエステル; Lygodium circinnatum; Anemia phyllitidis; antheridic acid; ディファレンシャル スクリーニング

フサシダ科Lygodium属のシダの主要造精器誘導物質であるGA_<73> methylester(GA_<73>-Me)の生合成経路を追究した。カニクサ(L.japonicum)など3種のLygodium属のシダのうち、GA_<73>-Meの生合成量がもっとも多かったL.circinnatumを用いてGA_<73>-Meの生合成経路の追究を行った。前葉体中のGA分析結果に基づいてC-7カルボン酸のメチルエステル化はGA_<73>への変換後起こると推定した。GA_<73>の生合成については、9,15-cyclo-GA_9が前駆体である可能性、及び他のGAと同様の経路で生合成されている可能性が考えられる。そこで、L.circinnatum前葉体に9,15-cyclo-GA_9,GA_<24>、及びGA_9の重水素標識体を投与し、その代謝物の同定を試みた。その結果、GA_<73>-Meは9,15-cyclo-GA_9由来ではなく、GA_<24>を経て生合成されること、GA_<24>からGA_<73>への変換はGA_9を経由しないことが示された。一方、造精器誘導物質の作用発現機構追究の一環として、A.phyllitidis配偶体において、その主要造精器誘導物質であるantheridic acid処理により発現が誘導、あるいは抑制される遺伝子の単離を試みた。造精器誘導物質に対する反応性が高い暗黒下培養した原糸体を試料とした。Antheridic acid処理した試料のpoly(A)^+RNAからcDNA libraryを作成し、処理・未処理各々のpoly(A)^+RNAより調製したプローブを用いてディファレンシャルスクリーニングを行ったが、antheridic acid処理により発現量が変化すると考えられるクローンは得られなかった。そこで、処理・未処理のcDNAを用いWang&Brown(1991)により報告されたサブトラクション法を試みることとした。現在、6回のサブトラクションを行い、誘導、抑制遺伝子が分離濃縮されたと考えられるcDNAプールを得た。これらをプローブとして誘導・抑制遺伝子のスクリーニングを継続中である。

The main spermatogenesis-inducing substance of Lycium spp. is GA_<73>methylester(GA_<73>-Me). The <73>synthesis of GA_ -Me <73>in three Lygodium species was investigated. The results of GA analysis in prophyllum showed that C-7 was the most important component of GA in prophyllum<73>. The possibility of GA_<73>s biosynthesis, 9,15-cyclo-GA_9 precursor biosynthesis, and the possibility of GA_s biosynthesis in the same pathway are examined. The identification of 9,15-cyclo-GA_9,GA_9 and GA_9 in prophyllum of L. circinatum <24>was studied. The results show that GA_<73>-Me 9,15-cyclo-GA_9 is derived from GA_-Me 9,15-cyclo-GA_9, and <24>GA<24>_-Me 9,15-<73>cyclo-GA_9 is derived from GA_-Me 9,15-cyclo-GA_9. The mechanism of spermatogenesis-inducing substance development was investigated in one cycle. A. phyllidis partner was treated with antheritic acid to induce and inhibit spermatogenesis-inducing substance development. Spermatogenesis-inducing substances are highly reactive and cultured in the dark. The poly(A)^+RNA fragment cDNA library of the anteridic acid-treated sample was prepared, processed and untreated. The poly(A)^+RNA fragment cDNA library was prepared and processed. The poly(A)^+RNA fragment cDNA library was prepared and processed. Wang&amp;Brown(1991): A New Approach to cDNA Processing Now, six rounds of DNA sequencing, induction, suppression of DNA isolation and concentration, and detection of DNA sequencing were performed. This is the first time I've ever seen a person who's been in a relationship with someone who's been in a relationship with me.