ラット脊髄・後根神経節における脂質性二次メッセンジャー代謝酵素の遺伝子発現局在

大鼠脊髓和背根神经节脂质第二信使代谢酶基因表达的定位

• 批准号: 13877235
• 负责人: 高木 理彰
• 金额: $ 0.32万
• 依托单位: Yamagata University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 2002
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-13877235/
• 关键词: 二次メッセンジャー; 脊髄; 後根神経節; 免疫組織化学; 細胞内局在; 核細胞質移行; ジアシルグリセロールキナーゼ; in situハイブリダイゼーション; ラット

ジアシルグリセロール(DG)は生体内の細胞において、様々な脂質代謝の中間体としてのみならず、細胞内二次メッセンジャーとしても重要な役割を果たす。種々の蛋白質をリン酸化するプロテインキナーゼC(PKC)はこのDGにより活性調節を受けることから、DGキナーゼ(DGK)はこのDGの代謝を介してPKC活性をコントロールする役割を果たす。我々はこれまでラット脳より5つのDGKアイソザイム(DGKalpha, -beta, -gamma, -zeta, -iota)のクローニングを行い、脳内遺伝子発現を報告してきた。本研究では、ラット脊髄・後根神経節におけるこれらDGKアイソザイムの機能的役割を追求する目的で、これまで得られた遺伝子発現局在の解析に加え、抗体の作製による蛋白局在の検討を行った。抗体の作成に関しては、各々のDGKアイソザイムに特異的な領域を選択しグルタチオンSトランスフェラーゼ(GST)との融合蛋白質として大腸菌にて大量培養発現を行った。グルタチオンカラムによる精製後、家兎に免疫を行い、現在血清からの抗体精製を行っている。抗体作成の成功したDGKzetaに関して、後根神経節を中心に細胞内局在を精査したところ、個々の神経節細胞ごとに局在が異なることを見い出した。とりわけ比較的小型の細胞においては、核と細胞質における分布に大きなばらつきが認められ、刺激に応答した細胞内局在の変化の可能性を示唆するものであった。サブスタンスPやCGRPなどの神経ペプチドホルモンの免疫組織化学像との比較を行ったところ、DGKzetaの細胞内局在様式との有意な相関は認められなかった。現在さらに、座骨神経の切断実験および末梢へのエタノール注入による刺激実験による局在の変化を検討中である。

In vivo, DG is an intermediate of lipid metabolism and an important component of intracellular secondary metabolism. The protein metabolism of DG is mediated by the activity of PKC (PKC) and DG (DGK). I am going to report the occurrence of DGK in the middle of the process and the occurrence of DGK in the middle of the process. In this study, we investigated the role of DGK in the detection of protein in the analysis and production of antibodies. The production of antibodies is related to the selection of specific domains for each DGK fusion protein (GST) and the mass culture development of Escherichia coli. After purification, immunization, and purification of antibodies in serum. The antibody was successfully produced in the central part of the brain. Compared with small cells, nuclear and cytoplasmic distribution, large cell size, stimulation, and the possibility of intracellular transformation are also shown. Comparison of Immunohistochemical Images of CGRP and DGKzeta in Human Brain Tissue Now, in the middle of the day, the brain is cut off and the brain is injected into the brain.

项目成果

Sasaki H., Takagi M., Ogino T., Kondo H., Goto H.: "Gene expression of diacylglycerol kinase in the rat spinal cord and dorsal root ganglia"Transactions, News science. 31. 392 (2001)

Sasaki H.、Takagi M.、Ogino T.、Kondo H.、Goto H.：“大鼠脊髓和背根神经节中二酰甘油激酶的基因表达”交易，新闻科学。

笹木勇人, 後藤薫, 高木理彰, 荻野利彦: "ラット脊髄・後根神経節におけるジアシルグリセロールキナーゼ遺伝子の発現局在解析"日本整形外科学会誌. 75(8). s958 (2001)

Hayato Sasaki、Kaoru Goto、Rio Takagi、Toshihiko Ogino：“大鼠脊髓和背根神经节中二酰基甘油激酶基因表达的局部分析”日本骨科学会杂志 75(8) (2001)。