7回膜貫通型受容体におけるG蛋白質活性化部位の最小単位同定とその立体構造解析
七次跨膜受体G蛋白激活位点最小单位的鉴定及其三维结构分析
基本信息
- 批准号:13877366
- 负责人:
- 金额:$ 1.09万
- 依托单位:
- 依托单位国家:日本
- 项目类别:Grant-in-Aid for Exploratory Research
- 财政年份:2001
- 资助国家:日本
- 起止时间:2001 至 2002
- 项目状态:已结题
- 来源:
- 关键词:
项目摘要
一次構造の判明したオーファント7回膜貫通型受容体について、その膜貫通部位をプログラム(SOSUI, TopPred, TMHMM等)を用いて予測した。その結果Gタンパク質活性化能が高いといわれている細胞内第3ループの位置はすべてのプログラムでほぼ同じであった。そのループ内において特にGタンパク質活性化能の強い部分を特定するためにループ内の様々な部分について検討し、その、一部分をFmoc法(Applied Biosystem 433A)、逆相HPLC(WATERS; C18カラム)、大気圧イオン化法マススペクトル(Perkin-Elmer SCIEX APIII)を用い化学合成した。そのペプチドを用いGタンパク質(Gi_α-2 subunit, Myristoylated, Rat, Recombinant〕との相互作用を検討した。合成ペプチドに10倍ずつ、4段階の濃度(1.7×10-3〜1.0×10-1[μM])とGタンパク質のサンプル溶液を混合し ニトロセルロースフィルタで濾過し Gタンパク質に取り込まれた[35S]GTPγSの計数を液体シンチレーションカウンタで測定した。受容体ペプチドを加えない溶液の測定値をコントロールとして計数比を求め、受容体ペプチドによるGタンパク質の活性化機能を測定した その結果このループペプチドとGタンパク質のモル比約1:1のとき、最大活性を得ることができた。
A tectonic の.at し た オ ー フ ァ ン ト type 7 transmembrane back by let body に つ い て, そ の transmembrane part を プ ロ グ ラ ム (SOSUI TopPred, TMHMM) を with い て in measuring し た. そ の results G タ ン パ ク activation can が high quality い と い わ れ て い る cell 3 ル ー プ の position は す べ て の プ ロ グ ラ ム で ほ ぼ with じ で あ っ た. Within そ の ル ー プ に お い て, に G タ ン パ ク qualitative activeness strong い の part を specific す る た め に ル ー プ の within others 々 な part に つ い て beg し 検, そ の part, を Fmoc method (Applied Biosystem, 433 a), reverse phase HPLC (WATERS; C18 カ ラ ム), large 気 圧 イ オ ン polarization method マ ス ス ペ ク ト ル (Perkin Elmer SCIEX APIII) を い chemical synthetic し た. そ の ペ プ チ ド を with い G タ ン パ ク mass (Gi_ alpha 2 subunit, Myristoylated, Rat, Recombinant) と の interaction を beg し 検 た. Synthetic ペ プ チ ド に 10 times ず つ, four order の concentration (10-3 ~ 1.0 x 1.7 x 10-1 [mu M]) と G タ ン パ ク qualitative の サ ン プ を ル solution mixed し ニ ト ロ セ ル ロ ー ス フ ィ ル タ で filtration し G タ ン パ ク qualitative に take り 込 ま れ た [35 S] GTP gamma counting S の を liquid made シ ン チ レ ー シ ョ ン カ ウ ン タ で determination し た. By the capacity of body ペ プ チ ド を plus え な の い solution numerical を コ ン ト ロ ー ル と し て count than め を o, let the body ペ プ チ ド に よ る G タ ン パ ク qualitative の active mechanism can measure を し た そ の results こ の ル ー プ ペ プ チ ド と G タ ン パ ク qualitative の モ ル than about 1:1 の と き, maximum active を る こ と が で き た.
项目成果
期刊论文数量(4)
专著数量(0)
科研奖励数量(0)
会议论文数量(0)
专利数量(0)
Okuda, A., Matsumoto, O., Akaji, M., Taga, T., Ohkubo, T., Kobayashi, Y.: "Solution Structure of Intracellular Signal-Transducing Peplide Derived from Human β2-Adrenergic Receptor"Biochem.Biophys.Res.Comm.. 291. 1297-1301 (2002)
Okuda, A.、Matsumoto, O.、Akaji, M.、Taga, T.、Ohkubo, T.、Kobayashi, Y.:“源自人 β2-肾上腺素受体的细胞内信号转导肽的溶液结构”Biochem.Biophys .Res.Comm..291.1297-1301 (2002)
- DOI:
- 发表时间:
- 期刊:
- 影响因子:0
- 作者:
- 通讯作者:
Okuda, A. et al.: "Solution structure of Intracellular Signal Transducing Peptide Derived from Human β2-Adrenergic Receptor"BBRC. (in press).
Okuda, A. 等人:“人 β2-肾上腺素受体衍生的细胞内信号转导肽的溶液结构” BBRC(印刷中)。
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