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マウス遺伝子改変の高効率化:ターゲティングベクターの正確かつ迅速な構築法

マウス遺伝子改変の高効率化:ターゲティングベクターの正確かつ迅速な構築法
高效小鼠基因修饰：精准快速的靶向载体构建方法
批准号：
15657041
负责人：
和田 洋
金额：
$2.18万
依托单位：
Osaka University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2003
资助国家：
日本
项目状态：
已结题
起止时间：
2003 至 2004
来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-15657041/
关键词：
遺伝子改変動物形質転換オルガネラノックアウトマウス相同組換えES細胞トランスジェニックマウスターゲティングベクター大腸菌人工染色体

项目摘要

项目成果

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遺伝子改変マウスの作出は,複雑なin vitroでの遺伝子操作,ES細胞の培養,そして胚操作による個体の作出など,多数のステップからなる長期の綿密な実験を必要とする.本研究では大腸菌内相同組換え法を導入することにより,BACクローン上で迅速に遺伝子改変を進める遺伝子構築技術を確立する.このため,セレクションマーカとしてジフテリア毒素Aフラグメントを発現するベクターを改変し,Srf I, Pme Iなどのrare restriction siteを組込み、ES細胞に導入する際に直鎖化するのに便利なプラスミド,pBSDT-AIIを作成した.次に,ES細胞内駆動用PGK promoterと大腸菌内用EM7 promoterのキメラプロモータを使用し,さらにはES細胞内でNeoを選択的に除去できるようにするため,flp recombinaseの認識サイトとlox Pを両端にもつ遺伝子カセットをもつプラスミド,pGPS21loxFRTNeoを作成した.このカセットを実際にES細胞内に形成導入した結果,ES細胞にG418耐性を付与することが示された.さらに第三のlox Pを挿入するため,pMODloxZeoDAmp-3を構築した.このplasmidはTn5のtranspositionに必須な領域に挟まれた形でloxP-Zeo-loxPカセットを有しており,試験管内での反応により,カセットを任意のDNAに挿入することができる.これらの遺伝子モジュールを用いてmVam2, V-ATPase a3について遺伝子破壊を進め、キメラマウスの作出と遺伝子破壊マウスの作成に成功した.本手法の導入によって多細胞生物の遺伝子変換の最初のステップをきわめて効率化・迅速化することができた.
期刊论文(8)
专著(0)
科研奖励(0)
会议论文
Sun-Wada, G.H.et al.: "Diversity of mouse proton-translocating ATPase : presence of multiple isoforms of the C,d and G subunits."Gene. 302. 147-153 (2003)
Sun-Wada, G.H.等人：“小鼠质子转位 ATP 酶的多样性：C、d 和 G 亚基的多种亚型的存在。”基因。
DOI： --
发表时间：
期刊：
影响因子： --
作者： []
通讯作者：
Regulatory elements directing gut expression of the GATA6 gene during mouse early development
小鼠早期发育过程中指导 GATA6 基因肠道表达的调控元件
DOI： --
发表时间： 2004
期刊： J Biochem 135
影响因子： --
作者： [M.Aoyama et al., G.-H.Sunwada et al.]
通讯作者： G.-H.Sunwada et al.
Simple and straightforward construction of a mouse gene targeting vector using in vitro transposition reaction
利用体外转座反应简单直接地构建小鼠基因靶向载体
DOI： --
发表时间： 2005
期刊： Nucleic Acids Res. (印刷中)
影响因子： --
作者： [M.Aoyama et al.]
通讯作者： M.Aoyama et al.
Hirata, T.et al.: "Subunit rotation of vacuolar-type proton pumping ATPase : Relative rotation of the G as to c subunit"J.Biol.Chem.. 278. 23714-23719 (2003)
Hirata, T.et al.：“液泡型质子泵 ATP 酶的亚基旋转：G 相对于 c 亚基的相对旋转”J.Biol.Chem.. 278. 23714-23719 (2003)
DOI： --
发表时间：
期刊：
影响因子： --
作者： []
通讯作者：
共 6 条
    オルガネラ酸性化が担う細胞極性の確立と維持のメカニズム
    • 批准号：
      23K27167
    • 项目类别：
      Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
    • 资助金额：
      $8.74万
    • 财政年份：
      2024
    • 负责人：
      和田 洋
    • 依托单位：
      Osaka University
    オルガネラ酸性化が担う細胞極性の確立と維持のメカニズム
    • 批准号：
      23H02474
    • 项目类别：
      Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
    • 资助金额：
      $11.81万
    • 财政年份：
      2023
    • 负责人：
      和田 洋
    • 依托单位：
      Osaka University
    複雑ネットワークの視点からの新規細胞タイプの進化
    • 批准号：
      18H04004
    • 项目类别：
      Grant-in-Aid for Scientific Research (A)
    • 资助金额：
      $27.87万
    • 财政年份：
      2018
    • 负责人：
      和田 洋
    • 依托单位：
      University of Tsukuba
    ヒガシナメクジウオ卵における受精前後の細胞内骨格と母性mRNAの動態
    • 批准号：
      07F07704
    • 项目类别：
      Grant-in-Aid for JSPS Fellows
    • 资助金额：
      $1.41万
    • 财政年份：
      2007
    • 负责人：
      和田 洋
    • 依托单位：
      University of Tsukuba
    海外基金