軟体動物アルギン酸リアーゼの起源と遺伝子構造に関する研究

软体动物海藻酸裂解酶的起源及遗传结构研究

• 批准号: 15658061
• 负责人: 尾島 孝男
• 金额: $ 1.79万
• 依托单位: Hokkaido University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2003
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2003 至 2004
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-15658061/
• 关键词: アルギン酸リアーゼ; 軟体動物; 一次構造; 遺伝子; cDNA; 分子クローニング; アワビ; ポリマンニュロン酸リアーゼ; タマキビガイ; クボガイ

本年度は、アワビ・エンド型アルギン酸リアーゼ(HdAly)の構造遺伝子を染色体DNAライブラリーからクローニングし、そのイントロンとエキソンの配置を解析した。構造遺伝子の塩基配列とcDNAの塩基配列とを比較した結果、HdAlyの構造遺伝子は2784bpから成り、2つのイントロンで分断された3つのエキソンから構成されることが明らかになった。イントロンの位置は5'-非翻訳領域内部および分泌シグナルと触媒部位の連結部位にそれぞれ存在していた。なお、HdAlyの触媒部位のコード領域は1つのエキソンから構成されていたが、これはHdAlyの構造遺伝子の起源が比較的新しいことを示すものと考えられる。一方、本年度はエゾアワビ消化液から新たにエキソ型のアルギン酸リアーゼHdAlexを単離した。HdAlexはSDS-PAGEで分子量約36,000の単一バンドを示し、poly(M)-blockを特異的に分解した。また、ポリマンヌロン酸分子の還元末端より2番目のグリコシド結合を切断することが明らかになった。次いでアワビ肝膵臓cDNAライブラリーからHdAlexのcDNAをクローン化し、その塩基配列を分析した。その結果、cDNAの翻訳領域822bpからHdAlex前駆体の273残基のアミノ酸配列が演繹された。さらに、HdAlexは翻訳後修飾により256アミノ酸残基から成る成熟体に変換されることが明らかになった。HdAlexのアミノ酸配列は、アワビのエンド型リアーゼHdAlyと67.2%、サザエのエンド型リアーゼと61.8%、およびクロレラウィルス・アルギン酸リアーゼ(CL2)と34.1%の相同性を示した。これらの結果より、エンド型とエキソ型のアルギン酸リアーゼ遺伝子が共通の祖先遺伝子から分化したことが強く示唆された。

This year は, ア ワ ビ · エ ン ド type ア ル ギ ン acid リ ア ー ゼ (HdAly) の tectonic heritage 伝 son を chromosome DNA ラ イ ブ ラ リ ー か ら ク ロ ー ニ ン グ し, そ の イ ン ト ロ ン と エ キ ソ ン の configuration を parsing し た. Tectonic heritage 伝 son の salt base with column と cDNA の salt base with column と を compare し た results, HdAly の tectonic heritage 伝 は 2784 bp か ら り, 2 つ の イ ン ト ロ ン で breaking さ れ た 3 つ の エ キ ソ ン か ら constitute さ れ る こ と が Ming ら か に な っ た. は イ ン ト ロ ン の position 5 '- not turn 訳 field internal お よ び secretion シ グ ナ ル と catalytic site の link に そ れ ぞ れ exist し て い た. な お, HdAly の catalyst sites の コ ー は ド field 1 つ の エ キ ソ ン か ら constitute さ れ て い た が, こ れ は HdAly の tectonic heritage 伝 の origin が comparing new し い こ と を shown す も の と exam え ら れ る. One party, this year's は エ ゾ ア ワ ビ digestive juices か ら new た に エ キ ソ type の ア ル ギ ン acid リ ア ー ゼ HdAlex を 単 from し た. The HdAlex に SDS-PAGEで has a molecular weight of approximately 36,000. The 単 - バ ドを ドを shows に, poly(M)-blockを specific に decomposition た た. ま た, ポ リ マ ン ヌ ロ ン acids の is yuan end よ り 2's の グ リ コ シ ド combining を cut す る こ と が Ming ら か に な っ た. Crucial time い で ア ワ ビ Cui liver cDNA ラ イ ブ ラ リ ー か ら HdAlex の cDNA を ク ロ ー ン し, そ の salt base with column を analysis し た. Youdaoplaceholder0 <s:1> results, cDNA <s:1> translocation of 訳 domain 822bp ら らHdAlex pro駆 body <s:1> 273 residue <e:1> ア ノ ノ acid coordination が derivation された. さ ら に, HdAlex は modification after turn 訳 に よ り 256 ア ミ ノ acid residues か ら into る mature body に variations in さ れ る こ と が Ming ら か に な っ た. HdAlex の ア ミ ノ acid with は, ア ワ ビ の エ ン ド type リ ア ー ゼ HdAly と 67.2%, サ ザ エ の エ ン ド type リ ア ー ゼ と 61.8%, お よ び ク ロ レ ラ ウ ィ ル ス · ア ル ギ ン acid リ ア ー ゼ (CL2) と 34.1% gay を の phase in し た. こ れ ら の results よ り, エ ン ド type と エ キ ソ type の ア ル ギ ン acid リ ア ー ゼ posthumous son 伝 が の common ancestral heritage 伝 son か ら differentiation し た こ と が く and shown strong sucking さ れ た.

项目成果

E.Shimizu, T.Ojima, K.Nishita: "cDNA cloning of an alginate lyase from abalone Haliotis discus hannai"Carbhydr.Res.. 338. 2841-2852 (2003)

E.Shimizu、T.Ojima、K.Nishita：“来自鲍鱼皱纹盘鲍的藻酸盐裂合酶的 cDNA 克隆”CarbHydr.Res.. 338. 2841-2852 (2003)

Production of oligoalginates by the digestion of Laminaria with abalone alginate lyase

用鲍鱼藻酸盐裂解酶消化海带生产藻寡酸盐

• 发表时间: 2004
• 期刊: 6^<th> Asia-Pacific Marine Biotechnology Conference (China)
• 作者: S.Yamamoto;H.Suzuki;K.Suzuki;T.Ojima
• 通讯作者: T.Ojima