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マウス卵巣への効率的な遺伝子導入法の開発

开发高效基因转移至小鼠卵巢的方法

基本信息

批准号：
15658084
负责人：
佐藤正宏
金额：
$ 2.37万
依托单位：
Tokai University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2003
资助国家：
日本
起止时间：
2003 至 2004
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-15658084/
关键词：
マウス卵巣遺伝子導入 electroporation プラスミド EGFP 濾胞 lacZ

项目摘要

老化は個体の生理的現象であるが、出産を希望する年齢が高齢化するにつれ、出産能力の維持や回復を目的とした医療が切望されるようになってきた。個体の寿命が伸びているにもかかわらず、加齢にともなう卵巣の機能停止(閉経)は平均50歳と変化なく、卵巣は最も早く老化する器官のひとつである。また、出産率から算出すると、閉経より15年以上前の30歳代後半から加齢の影響が出ている。加齢による卵巣の機能低下は、卵子の発育停止による排卵数の減少を引き起こす。卵巣は卵母細胞とそれを囲む濾胞細胞及びそれらを支える間質細胞(thecal cell)とから成る。加齢による卵巣の機能低下の原因の一つとして、卵子の周囲を取り囲む濾胞細胞の酸化ストレス等による機能低下が考えられている。この濾胞細胞へ直接遺伝子導入が出来れば、加齢に伴う濾胞細胞の劣化を多少とも救済出来、卵巣自体の老化を防止出来る可能性がある。我々は、2003年度に報告した卵巣内部への直接的遺伝子注入、続くelectroporationという方法(Sato et al.,genesis 35:169-174,2003)を用いて、卵巣内の細胞への遺伝子導入を推進して来た。特に、2004年度の目標は、1)卵巣表面に発達するpreantral follicleを標的に遺伝子導入が可能かどうか。2)卵子あるいは濾胞細胞特異的な遺伝子群(例えば、GDF[growth differentiation factor]-9)の導入・過剰発現あるいはRNAi等による内在性遺伝子発現抑制による卵巣機能への影響を調べる、という点であった。1)項目については、従来法に改良(卵巣内に10-20μl程の大量のDNA液を注入;従来のmouth-pieceでの液の注入ではなく、注射筒による注入により達成)を加えることにより、濾胞全体の5-10%に遺伝子(EGFP)を導入することが出来た(論文作製中)。2)項目については、マウスGDF-9 cDNAをRT-PCRにて単離している最中である。周知のように、GDF-9は1-2層の濾胞(primary follicle)以上の比較的幼若な濾胞細胞に対し、成長促進効果を持つとされる。GDF-9発現ベクターを加齢卵巣に遺伝子導入・発現させることにより、濾胞自体の若返りが期待される。2004年度の段階では、未だ、画期的な成果を出すには至らなかったことで、若干の悔いは残るが、その積み上げた土台を基に、卵巣細胞へ標的を向けた遺伝子導入系の更なる確立を目指して行きたいと考えている。

Aging is a physiological phenomenon of the individual, production is expected to increase, and medical treatment is expected to maintain and restore productivity. The life span of an individual is longer than 50 years, and the function of the egg is stopped (closed). The age of the egg is the earliest. In addition, the impact of the increase in production rate is calculated from 15 years ago to 30 years ago. Increased egg dysfunction, egg development arrest, decreased ovulation rate, and other factors contribute to this decline. Oocytes and mesenchymal cells In addition, the reasons for the low function of the egg are as follows: 1. The cycle of the egg is taken from the filter cell and the acid is taken from the filter cell. The possibility of direct gene transfer from the filter cells to the cells, and the possibility of gene transfer from the filter cells to the cells, and the possibility of gene transfer from the cells to the cells, and the possibility of gene transfer from the cells to the cells, and the possibility of gene transfer from the cells to the cells, is discussed. In our 2003 annual report, direct electron injection, electroporation, and other methods were used to investigate the effects of electron transfer on the growth of human cells (Sato et al., genesis 35:169- 174, 2003). In particular, the objectives for 2004 are as follows: 1) The introduction of pre-natal follicle targets on egg surfaces is possible. 2)The introduction of cell-specific gene subsets (e.g., GDF[growth differentiation factor]-9) into the egg, the inhibition of intrinsic gene expression, the inhibition of egg function, etc. 1) The improvement of the project (10-20μl of DNA solution was injected into the egg; the injection of DNA solution into the mouth-piece was completed; the injection into the syringe was completed). 5-10% of the total number of EGFP was introduced into the filter cell (paper under preparation). 2) RT-PCR of GDF-9 cDNA was carried out in the middle of the project. GDF-9 is known to have 1-2 layers of primary follicle and more than 1 - 2 layers of primary follicle. GDF-9 is expected to be developed in the future. In 2004, the results of the stage, the stage and the stage were determined.