C型肝炎ウイルスコア蛋白と結合するDNA修復酵素の遺伝子クローニング

与丙型肝炎病毒核心蛋白结合的DNA修复酶的基因克隆

• 批准号: 15659176
• 负责人: 石橋 大海
• 金额: $ 2.11万
• 依托单位: Department of Clinical Research, National Hospital Organization Nagasaki Medical Center
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2003
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2003 至 2004
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-15659176/
• 关键词: C型肝炎ウイルス; HCVコア蛋白; DNA修復酵素; 遺伝子クローニング; 肝発癌機構; DNA修復機構関連蛋白; 哺乳類細胞発現ベクター; 肝細胞癌

C型肝炎ウイルス(HCV)感染の持続感染が肝細胞の癌化に深く関わっていると推察されている。肝発癌機構として、HCVコア蛋白が発癌過程に関与する様々な宿主因子と相互作用してC型慢性肝炎からの発癌を誘導する可能性が提唱されている。本研究は、HCVに伴う肝発癌機構を解明する目的で、HCV-コア蛋白がDNA修復機構関連蛋白と結合することにより、その機能を修飾してDNA修復を阻害する、という仮説をたて研究を開始した。まず、HCV-コア蛋白と結合する蛋白を遺伝子レベルで網羅的なスクリーニングをおこない、この仮説を検証することとした。HCVコア蛋白をほ乳類細胞中に高発現させ、そのときの宿主細胞におけるDNA修復酵素への影響を調べた。HCVはジェノタイプによりさまざまな領域に変異体や特異性があることから、日本人に多い1b患者血清から、HCV-RNAを単離、cDNAを作製し、コア蛋白コード領域をクローン化した。次に、内部配列を確認し、1b野生型のクローンを選択し、哺乳類細胞発現ベクター(tag付き)に挿入した。作製したベクターを培養細胞株に遺伝子導入し、HCV-コア蛋白の発現をWestern blot法で確認したところ、コントロールベクター導入細胞では、tag蛋白の発現は確認できたが、コア蛋白領域を含むベクターでは発現が確認出来なかった。現在、他の培養細胞株を用いてHCVコア蛋白安定発現株の取得を目指しているが実現できていない。実現できたら、肝細胞からのcDNAライブラリーの作製に着手する予定である。

Hepatitis C virus (HCV) infection and persistent infection are closely related to hepatocellular carcinogenesis. Liver carcinogenesis mechanisms, HCV protein involvement in carcinogenesis, host-factor interactions, and the possibility of carcinogenesis induced by chronic hepatitis C This study is aimed at clarifying the mechanism of HCV associated with liver cancer, and at studying the binding of HCV-1 protein to DNA repair mechanism, its function, and its inhibition of DNA repair. The HCV-1 protein binding protein is a member of the HCV-1 family. HCV protein is highly expressed in mammalian cells and regulates the effects of DNA repair enzymes on host cells. HCV is highly specific in the field of HCV infection, and in Japanese patients, HCV RNA is isolated, cDNA is produced, and HCV protein is purified. Second, internal alignment was confirmed, 1b wild-type was selected, and mammalian cells were identified. Western blot method was used to confirm the expression of HCV-1 protein in cultured cell lines. Western blot method was used to confirm the expression of HCV-1 protein in cultured cell lines. Now, his cultured cell lines are used to obtain HCV protein stable strains. The cDNA sequence of liver cells was established and the production of cDNA sequence of liver cells was started.

项目成果

Short-term interferon-alfa therapy for acute hepatitis C: A randomized controlled trial

• DOI: 10.1002/hep.20196
• 发表时间: 2004-05-01
• 期刊: HEPATOLOGY
• 影响因子: 13.5
• 作者: Nomura, H;Sou, S;Kashiwagi, S
• 通讯作者: Kashiwagi, S

Nomura H, Sou S, Nagahama T, Hayashi J, Kashiwagi S, Ishibashi H.: "Efficacy of early retreatment with interferon beta for relapse in patients with genotype Ib chronic hepatitis C."Hepatology Research. 28(1). 36-40 (2004)

Nomura H、Sou S、Nagahama T、Hayashi J、Kashiwagi S、Ishibashi H.：“干扰素β早期再治疗对基因型 Ib 慢性丙型肝炎患者复发的疗效”。肝病学研究。

Nomura H, Tanimoto H, Sou S, Nagahama T, Hayashi J, Kashiwagi S, Ishibashi H.: "Pilot study of prolonged interferon-alpha retreatment in chronic hepatitis C patients with genotype 1b."Hepatology Research. 27(4). 266-271 (2003)

Nomura H、Tanimoto H、Sou S、Nagahama T、Hayashi J、Kashiwagi S、Ishibashi H.：“基因型 1b 慢性丙型肝炎患者长期干扰素-α 再治疗的试点研究。”肝病学研究。

Kono Y, Hayashida K, Tanaka H, Ishibashi H, Harada M.: "High-density lipoprotein binding rate differs greatly between genotypes 1b and 2a/2b of hepatitis C virus."Journal of Medical Virology. 70(1). 42-48 (2003)

Kono Y、Hayashida K、Tanaka H、Ishibashi H、Harada M.：“丙型肝炎病毒基因型 1b 和 2a/2b 之间的高密度脂蛋白结合率差异很大。”医学病毒学杂志。

Dohmen K, Shigematsu H, Irie K, Ishibashi H.: "Comparison of the clinical characteristics among hepatocellular carcinoma of hepatitis B, hepatitis C and non-B non-C patients."Hepatogastroenterology. 50(54). 2022-2027 (2003)

Dohmen K、Shigematsu H、Irie K、Ishibashi H.：“乙型肝炎、丙型肝炎和非乙型非丙型肝炎患者肝细胞癌的临床特征比较。”肝胃肠病学。