培養巨核球からの血小板産生に及ぼすNadrinノックダウンの影響

Nadrin 敲低对培养巨核细胞血小板生成的影响

• 批准号: 15659233
• 负责人: 山本 正雅
• 金额: $ 1.41万
• 依托单位: Tokyo Metropolitan Organization for Medical Research
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2003
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2003 至 2004
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-15659233/
• 关键词: Nadrin; GTP-ase; RhoGAP; ノックダウン; RNAi; 巨核球; 血小板; イソフォーム; GTPase; Rho; PDZドメイン

血小板は巨核球の細胞質の一部がちぎれて産生される。産生にはちぎれ方が極性をもって起きることや、細胞骨格の再構築や、顆粒のパッキングなどをコントロールする反応が起きる必要がある。これらの反応にはGTPを介するエネルギーの利用が盛んに行われる。Nadrinは低分子量G蛋白質Rhoファミリーに対するGTPase活性促進蛋白質(Rho-GAP)であり、神経伝達物質の放出や神経突起の伸長に関与する蛋白である。本研究ではヒト血小板にも豊富に存在することを示した。ラットNadrinにはNadrin102、Nadrin104、Nadrin116、Nadrin126の4種類のイソフォームがあり機能が異なると考えられている。各4種類のイソフォームを見分けるウサギ抗体を作製し、ヒト巨核球と血小板の発現を調べた。その結果、ヒト巨核球細胞株MEG-01にはラット同様4種類のNadrinイソフォームが存在することが明らかになった。興味深いことに、ヒト血小板にはNadrin102とNadrin116の発現はなく、主にNadrin104と極少量のNadrin126だけが発現しており、イソフォームが巨核球からの血小板の産生と関係すると思われた。そこで、MEG-01をTPAで処理し血小板を産生させるように分化誘導するとMEG-01のNadrin104には変化なく、Nadrin102,Nadrin116とNadrin126の発現の特異的な減少が認められイソフォームの血小板産生への関与が示唆された。Nadrinイソフォームの共通部分のRNAi用ベクターを作製しCOS細胞に発現したNadrin104の低下を確認した後、ヒト巨核球MEG-01にノックダウンを行った。しかしRNAiによりMEG-01の血小板の産生、形態に変化を認めなかった。血小板産生にはRNAiで残存したNadrinが機能している可能性も否定できなかった。またラット血小板はヒトと異なり4種全てのNadrinの発現が認められイソフォームは直接ラット血小板産生に関係しないと考えられる成績を得た。Nadrinイソフォームの発現が種差により異なることが明らかになり、Nadrinと血小板産生に関し、種差を考慮した検討が必要であると思われる。

Platelet megakaryocyte cytoplasm part of the production of the same. It is necessary to create a new structure for the cell skeleton and particle structure. This is the first time I've ever seen a woman. Nadrin is a low molecular weight G protein related to GTase activity-promoting protein (Rho-GAP). This study shows that there is no such thing as a rich platelet. Nadrin102, Nadrin104, Nadrin116 and Nadrin126 are four types of software. Each of the four types of antibodies is regulated by the presence of antibodies, megakaryocytes and platelets As a result, the MEG-01 megakaryocyte cell line has the same four species of Nadrin and its presence is obvious. The results showed that Nadrin102 and Nadrin116 were found in the plasma, Nadrin104 and Nadrin126 were found in the plasma, and the relationship between megakaryocyte and platelet production was discussed. MEG-01 TPA treatment induces differentiation of platelet production. MEG-01 Nadrin104, Nadrin102,Nadrin 116 and Nadrin126 produce specific reductions in platelet production. Nadrin104 was detected in COS cells by RNAi in the common part of Nadrin104, which was detected in MEG-01 cells. MEG-01 Platelet Production and Morphology Platelet production is not a function of RNAi. The results of the study indicate that there are four kinds of complete Nadrin in platelet production. Nadrin and platelet production are related, and the seed difference is considered necessary.