血友病A患者からモノクローナルインヒビターと抗イディオタイプ抗体の作製と抗原解析

A型血友病患者单克隆抑制剂和抗独特型抗体的制备和抗原分析

• 批准号: 21659242
• 负责人: 山本 正雅
• 金额: $ 1.98万
• 依托单位: Ohu University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Challenging Exploratory Research
• 财政年份: 2009
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2009 至 2010
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-21659242/
• 关键词: ヒト杭体; SPYMEG; 血友病A; インヒビター; イディオタイプ抗体; 細胞融合; 電気的細胞融; 抗体産生細; ヒト抗体; インヒビタ

【目的】ヒト末梢単核球をSPYMEG細胞とPEG法で融合しヒト抗体産生ハイブリドーマを作製する方法によりヒトインフルエンザウイルスに対する抗体作製が可能であることを示してきた(BBRC387(2009)180-185)。本法を用いて、血友病A患者に発生したインヒビター抗体の作製を目的とした。【結果】細胞融合には化学的なPEG法を用いた。コロニー形成率は10～30%と低かった。ハイブリドーマ培養上清の抗体をELISA法によりスクリーニングしたがインヒビター陽性ウェルは確認できなかった。感染症患者から抗インフルエンザウイルス抗体を作製したようにはインヒビター抗体が得られなかったことから、改善が必要と考え、(1)血中抗体の力価の差、(2)融合効率の改善、(3)抗体産生細胞の濃縮に関し検討した。(1)は高力価の患者を利用することで対応可能とした。(2)の対応は、電気的融合法を検討した。電気的手法は細胞への傷害が少なく、PEG法より高効率で抗体作製ができるとされる。SPYMEGでは電圧を400V以上にすることにより融合効率をPEGと同程度(100%融合率)に高めることに成功した。しかし本条件下では抗体産生率がPEG法に比べ約1/2と著しく低くPEG法を踏襲した。次に(3)であるが、血友病A患者からの融合成績では、融合初期に陽性クローンが確認できたが、培養途中で産生能を失うことが主な原因であった。そこで、抗原をコーティングした磁気ビーズを用い、抗体産生細胞を選択する方法を検討し、細胞を特異的に好成績であった。【考察】電気融合法はPEG法を超えなかったので、PEG法にて血友病A患者からのインヒビターの作製を試みたが、最終的に陽性クローンは得られなかった。今後、さらなる改善策として、磁気ビーズによる細胞の濃縮と、ウアバインなどによる遺伝子の脱落を抑えるなどの処理を行い、抗体産生を安定化させ、高力価のインヒビター陽性患者からの末梢単核球を調製し例数を多く試みる必要がある。

[Objective] To explore the possibility of antibody production by fusion of SPYMEG cells with PEG (BBRC387(2009)180-185). This method is used to develop antibodies against hemophilia A. [Results] Cell fusion was performed by PEG method. The rate of formation of The antibody in the HBRIIDER culture supernatant was confirmed to be positive by ELISA. (1) the difference in antibody strength in blood,(2) the improvement in fusion efficiency, and (3) the concentration of antibody-producing cells. (1)The patient has a high degree of stress and is able to use it (2)The fusion method of electricity and electricity is discussed. The method of electricity reduces the damage of cells, PEG method increases the efficiency of antibody control. SPYMEG has a high fusion rate of 400V or more. Under these conditions, the antibody production rate was about 1/2 lower than that of PEG method. (3) Hemophilia A patients: fusion results: positive results at the early stage of fusion: confirmation: loss of energy during culture: main reasons: The method of selecting antibody-producing cells is discussed, and cell-specific results are obtained. [Investigation] Electric fusion method PEG method for hemophilia A patients, PEG method for hemophilia A patients, final positive method In the future, we will improve the concentration of cells, the suppression of shedding, the stabilization of antibody production, and the number of peripheral lymphocytes modulated by high-intensity radiation.

项目成果

Broad neutralizing human monoclonal antibodies against influenza virus from vaccinated healthy donors.

从接种疫苗的健康供体中，针对流感病毒的人类单克隆抗体广泛中和。

• DOI: 10.1016/j.bbrc.2009.06.151
• 发表时间: 2009-09-11
• 期刊: Biochemical and biophysical research communications
• 影响因子: 3.1
• 作者: Kubota-Koketsu R;Mizuta H;Oshita M;Ideno S;Yunoki M;Kuhara M;Yamamoto N;Okuno Y;Ikuta K
• 通讯作者: Ikuta K

血液酸化抑制器具

血液氧化抑制装置

• 发表时间: 2010