GFPによるラットオピオイド受容体のリアルタイムでの可視化

使用 GFP 实时观察大鼠阿片受体

• 批准号: 15659375
• 负责人: 溝部 俊樹
• 金额: $ 1.22万
• 依托单位: Kyoto Prefectural University of Medicine
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2003
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2003 至 2004
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-15659375/
• 关键词: ラット; オピオイド; GFP; リアルタイム; 脱感作; desensitization; オピオイド受容体; リアルタイムイメージング

平成15年度に作成した3種(δ,κ,μ)のラットオピオイド受容体(ROR)とGFPとの融合遺伝子(ROR-GFP)を用いて以下の実験を行った。RORとROR-GFPをCOS細胞にDEAE-Dextran法でtransient transfectionし、得られた細胞膜を用いて3H-diprenorphineによるbinding isothermを行った。得られたROR-GFPのKd値は、3つのサブタイプともに、wild typeと有意差を認めず、ROR-GFPはwild typeと同様に、正常に機能していることがわかった。さらに、ROR-GFPをlipofectin法でHEK293細胞にtransient transfectionし、一過性に発現させ、生きている細胞をconfocal laser scan microscopyを用いて観察した。ROR-GFPはそのほとんどが細胞膜上に一様に分布していたが、サブタイプによる分布の違いが認められた。すなわち、δ subtypeは最も細胞膜上の分布が著しく、μ subtypeは細胞膜上だけでなく細胞質、特に核周囲にも多く分布しており、κ subtypeはその中間的分布を示した。以上、本実験において、ラットオピオイド受容体の分布を、生きている細胞でリアルタイムに観察することに成功した。なお、本研究の結果は、本年6月に神戸にて開催される第52回日本麻酔科学会学術集会において発表する予定である。

In FY2015, the following three types of (δ,κ,μ) fusion receptors (ROR) and GFP fusion genes (ROR-GFP) were produced and used. ROR-GFP cells were transfected with DEAE-dextran and bound to isozyme by 3H-diprenorphine. Get ROR-GFP Kd value, 3, wild type, intentional difference, ROR-GFP wild type, normal function. In addition, ROR-GFP lipofectin assay was used to detect HEK293 cells in transient transfection, transient detection, and confluent laser scan microscopy. ROR-GFP is distributed on the cell membrane in a manner that is consistent with its distribution. The distribution of the delta subtype on the cell membrane and the μ subtype on the cell membrane are shown in the cytoplasm and in the nucleus. The above results show that the distribution of receptors in cells is successful. The results of this study are expected to be presented at the 52nd academic meeting of the Japan Society of Science and Technology in June this year.