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肺塞栓症の病態である白血球・血小板凝集反応のRNA干渉法を用いたメカニズム解明

利用RNA干扰法阐明肺栓塞的病理状态——白细胞/血小板聚集的机制

基本信息

批准号：
17659492
负责人：
溝部俊樹
金额：
$ 2.11万
依托单位：
Kyoto Prefectural University of Medicine
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2005
资助国家：
日本
起止时间：
2005 至 2006
项目状态：
已结题

项目摘要

前年度において、我々は膝関節全景換手術症例を対象にした臨床実験により、Flow-Cytometry法,ELISA法,Whole Blood Impedance法等を用いて、下半身から還流された下大静脈内において、白血球(主に単球)、血小板、血管内皮細胞が相互作用を及ぼし互いに活性化される事によりLeukocyte-Platelet Conjugate, Microparticleの形成Tissue Factor, CD40Ligand等サイトカインの産生か行われ、それらがFibrin MonomerComplexの生成及び血液凝固亢進を引き起こす事を明らかにし、肺梗塞発生との関係を示唆した。それらの主な結果は、論文として本年度に公表した。(J Throrab Haemost.2007Apr;5(4):738-45,)本年度は、更にこれら血液細胞の相互作用のメカニズムをIn Vitroにおいて観察すべく、培養細胞、及びPrimary Cellを用いてRNAi法による遺伝子ノックダウンにより白血球-血小板間の相互作用が弱められることを明らかにした。具体的には、THP-1細胞及びヒト単球表面抗原のCD162(P-selectin glycoprotein-1),またはCD40をNucleofection法を用いてsiRNAを導入し、72時間後に表面抗原がノックダウンされていることを確認した細胞と血小板を共培養して、Leukocyte-Platelet Congugate産生の低下、Soluble Tissue Factor、CD142発現の低下、Microparticle産生の低下を確認した。また、血小板機能も抑制されることを確認した。

In the past year, we have been using the Flow-Cytometry method,ELISA method,Whole Blood Impedance method, etc. in the clinical practice of knee panoramic replacement surgery, and the lower body flow is also used in the lower vein. Leukocyte-Platelete Conjugate, Microparticle Formation Tissue Factor, and the interaction and activation of leukocytes (main lymphocytes), platelets, and vascular endothelial cells are also used. CD40 Ligand et al. showed the relationship between the formation of Fibrin Monomer Complex and the development of pulmonary infarction. This year's report is published in the form of a report on the results of the study. (J Throrab Haemost.2007Apr;5(4):738-45,) This year, RNAi has been used to investigate the interaction between blood cells, cultured cells, and Primary cells. Specifically, THP-1 cells and CD162 (P-selectin glycoprotein-1), CD40 and siRNA were introduced into the cells by Nucleofection method. After 72 hours, the expression of CD162 (P-selectin glycoprotein-1), CD40 and siRNA were confirmed. Platelet function inhibition was confirmed.