キメラ受容体を用いたアドレナリン受容体とオピエートμ受容体の相同性の検索

使用嵌合受体搜索肾上腺素能受体和阿片μ受体之间的同源性

基本信息

  • 批准号:
    10877243
  • 负责人:
  • 金额:
    $ 0.7万
  • 依托单位:
  • 依托单位国家:
    日本
  • 项目类别:
    Grant-in-Aid for Exploratory Research
  • 财政年份:
    1998
  • 资助国家:
    日本
  • 起止时间:
    1998 至 无数据
  • 项目状态:
    已结题

项目摘要

1) chimeric receptorの作成pGEM3Z vector上のヒトβ2アドレナリン受容体のTMD#4をrestriction enzymeを用いて切り出した。オピオイドμ受容体のTMD#4の塩基配列とrestriction siteを持つoligodeoxynucleotide(ODN)を作成しannealし、TMD#4を切り出したヒトアドレナリン受容体とこのODNをT4 ligaseを用いてligationした。これをmaxiprepし、Sanger法によるsequence analysisによって目的のキメラ受容体が得られているのを確認した後、このキメラ受容体をpCDNA3 vectorに移した。2) chimeric receptorのtransient transfection(DEAE dextran法)70%confluentとなったCOS7 cellをconstructを挿入されたpCDNA3 vector、及びDEAE dextranを含んだPBSとともにincubateした。48から72時間後にcell membraneをharvestした。3) chimeric receptorの機能解析(radiolabelled ligand binding assay)hot ligandとしてadrenergic ligandである3H-DHAを用いたbinding isothermを行いKd valueを求めようとしたが、このキメラ受容体は、3H-DHAに対して、親和性を認めなかった。すなわちこのキメラ受容体は、non-functionalであった。以上より、アドレナリン受容体とオピエートμ受容体の相同性は、TDM#4に関してはないと考えられる。
1)The β2-restriction enzyme on the pGEM3Z vector of the chimeric receptor is used to restrict the activity of the TMD#4 receptor. TMD #4 of the receptor has a restriction site for oligodeoxynucleotide(ODN). TMD #4 has a restriction site for oligodeoxynucleotide(ODN). The sequence analysis of the target receptor was carried out using the maxiprep and Sanger methods. 2)Chimeric receptor transient transfection(DEAE dextran method) 70% confluent COS7 cell construct containing pCDNA3 vector and DEAE dextran 48 72 hours later cell membrane harvests. 3)Chimeric receptor function analysis (radiolabeled ligand binding assay)hot ligandすなわちこのキメラ受容体は、non-functionalであった。The identity of the receptor is the same as that of TDM#4.

项目成果

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