蛍光色素を用いたCandida血症の迅速診断法の開発

使用荧光染料开发念珠菌血症快速诊断方法

• 批准号: 15659429
• 负责人: 高江洲 秀樹
• 金额: $ 2.05万
• 依托单位: Wakayama Medical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2003
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2003 至 2004
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-15659429/
• 关键词: 深在性真菌症; フローサイトメトリー; 蛍光色素; FUN-1; 迅速診断

本研究のFCM法では生物学的活性のある菌を迅速に検出することを目的とし、蛍光色素を用い生物学的活性をもつ真菌にたいして深在性真菌症の迅速診断法を確立し、PCRを用いた検出法と比較検討を行うことにある。研究に際する基礎実験として、CandidaのFUN-1蛍光色素に対する最適染色時間を決定すべくCandida臨床分離株を用いて10^6個に調整したCandida浮遊液にFUN-1蛍光色素を加え0分、30分、60分、90分、120分の時間間隔でFCMにて測定した。これにより反応開始より60分までは蛍光強度は増加し90分より減少傾向を示したため、FCMによる最適測定時間は60分と判断した。次にCandida、ヒト全血をそれぞれ蛍光色素で染色しFCMにおけるgating範囲を検討したところ、Candidaのgating範囲はヒト血球においては単核球におけるgating範囲に一致するエリアであることがわかった。常人全血にCandida液を加えたものをFCMにて測定を行った(I群)。FCMでは、その蛍光高度に幅が形成され、中には2峰性の蛍光強度を示すものも認められた。蛍光顕微鏡で観察したところ、Candidaはもとより、有核細胞に置いて蛍光強度に差は認めるもののFUN-1での蛍光が確認された。放射線照射により白血球機能を死活化させた血液にCandida液を加えたものをFCMにて測定を行った(II群)。FCMでは蛍光高度幅は狭く2峰性になることはなかった。FCLZ添加を行った検体(III群)ではI群と同様に蛍光高度幅に広がりは認められたが強度はI群よりも弱くなっていることがわかった。以上よりFUN-1を用いて染色した場合、Candida細胞と大きさが近似する単核細胞も染色されており、FCMでの計測では両者を測定している可能性が示唆される。今後、さらに研究を進めるために、他の色素を用いて2重染色を行い、また、単核細胞との分離法を模索し研究に役立てる予定である。

In this study, FCM was used to detect the biological activity of fungi and to establish PCR for comparison. The optimal staining time for FUN-1 in Candida suspension was determined by FCM at intervals of 0, 30, 60, 90 and 120 minutes. The light intensity increases by 90 minutes and decreases by 60 minutes. The optimum measurement time is 60 minutes. The second is Candida, Candida, whole blood, FCM, Gating, Candida, whole blood, whole blood. The whole blood was collected by FCM. FCM has two peaks in the intensity of light, one in the amplitude of light and the other in the amplitude of light. The light intensity difference of the nucleated cells is recognized by the light intensity difference of the nucleated cells. Radiation exposure to white blood cell function and death, Candida solution, and FCM determination (group II) FCM FCLZ adds a line to the body (group III), and the same light to the body (group I). The possibility of FUN-1 staining, Candida cell staining, and FCM measurement was also discussed. In the future, the study will be carried out by using two-fold staining with other pigments, and the separation method of mononuclear cells will be studied by modeling.