未知の遺伝子の機能を生体脳で探る-特定の成熟神経細胞に発現するウイルスベクター

探索活体大脑中未知基因的功能——在特定成熟神经元中表达的病毒载体

• 批准号: 16650071
• 负责人: 幸田 和久
• 金额: $ 2.18万
• 依托单位: Keio University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2004
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2004 至 2005
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-16650071/
• 关键词: レンチウイルス・ベクター; シンドビス・ウイルスベクター; 小脳; プルキンエ細胞; シナプス可塑性; PDZドメイン; レトロウイルス・ベクター; 顆粒細胞; クモ膜下腔

未知の遺伝子機能を解明するためにウイルスベクターを利用する我々の方略は以下の通りである。目的とする遺伝子の欠損マウスにその遺伝子の変異体を発現させる。これによって、欠損マウスの異常な表現型が回復しなければ、その機能に変異部位が重要な役割を担っていることになる。我々は目的遺伝子としたデルタ2グルタミン酸受容体(δ2)、は小脳平行線維・プルキンエ細胞間のシナプス形成と可塑性に重要な役割を果たしていることがδ2受容体欠損マウスの研究から明らかだが、δ2受容体がグルタミン酸によるチャネル活性を持たないため、その分子としての機能は不明である。まず、レンチウイルスベクターのクモ膜下腔への投与によって、マウス及びラット小脳プルキンエ細胞にGFPをかなり特異的に導入する系を確立した。このベクターを用いて、δ2受容体を発現させようとしたところ、ウイルスベクターの力価が上がらず、個体に投与しても発現が得られなかった。分子量のほぼ等しい、2型グルタミン酸受容体の発現は得られているので、これはδ2受容体特有の現象と考えられる。そこで、我々は、レンチウイルスベクターに代えて、シンドビスウイルスベクターを用いることにした。δ2受容体欠損マウスのプルキンエ細胞に野生型δ2受容体を発現させるとδ2受容体欠損マウスで見られる平行線維-プルキンエ細胞間シナプスの長期抑圧(LTD)の障害が回復した。δ2受容体の最C末端にはPDZドメインがあるが、これを含む7アミノ酸残基の欠失変異体を同プルキンエ細胞に発現させた場合は、LTDは存在するが野生型δ2受容体に比べ、有意に減弱していた。欠損させた7残基のアミノ酸を正常プルキンエ細胞に灌流しても同様の結果が得られた。以上からLTDが正常に生じるためにはδ2受容体がPDZドメインを介して他の分子と相互作用をしていることが必要であることが明らかになった(投稿準備中)。

The function of the unknown gene is explained in detail, and the strategy of using it is explained in detail below. The purpose of this paper is to introduce the development of genetic diversity. The abnormal phenotype of the disease is recovered, and the abnormal part of the disease is affected. The results of the study on the molecular structure of δ2 receptor are unclear, and the molecular structure of δ2 receptor is unknown. A specific GFP introduction system was established for the expression of GFP in cells of small and medium-sized cells. In addition to the above, the δ2 receptor can also be used to detect the presence of the receptor. The occurrence of molecular weight isoform and type 2 acid receptors was investigated. "We're going to have to do something about it," he said. Delta 2 receptor deficiency occurs in the wild type delta 2 receptor cells, and the delta 2 receptor deficiency occurs in the parallel linear dimension. The most C-terminal of the δ2 receptor contains the amino acid residue of the PDZ, which is found in the same cell as the wild type δ2 receptor. The results of cell perfusion were similar. The above is the case with PDZ receptor and PDZ receptor.