Hormonema属のポリリンゴ酸の生合成経路の解明とその効率的生産法の開発

激素属聚苹果酸生物合成途径的阐明及其高效生产方法的开发

• 批准号: 16656255
• 负责人: 星野 一宏
• 金额: $ 2.24万
• 依托单位: University of Toyama
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2004
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2004 至 2005
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-16656255/
• 关键词: ポリリンゴ酸; Hormonema属; ポリエステル; 生分解性高分子; 分泌生産; 水溶性ポリエステル; メラノイジン; 生体内分解吸収性高分子

本研究では、生分解性を有する直鎖状の水溶性ポリエステルであり、さらに側鎖に化学修飾が可能なカルボキシル基を有する新規な生体内分解吸収性高分子(ポリリンゴ酸)をHormonema属に属するカビを用いて効率的に生産させることを検討した。そのために、現在まで未知であるポリリンゴ酸の生合成経路の解明と、ポリリンゴ酸生産のための培養手法について検討した。具体的には17年度は以下の2点に関して検討した。i)Hormonema dematioides CBS128.64株の培養細胞を用いてTCA回路に関連する酵素活性を検討した結果、イソクエン酸デヒドロゲナーゼの活性が弱く、イソクエン酸リアーゼの活性が極めて強いこと。また、リンゴ酸シンテターゼの活性が非常に強いことが判明した。これらの結果から、ポリリンゴ酸は、グリオキシル酸経路の中間化合物であるリンゴ酸Co-Aを経てポリリンゴ酸シンテターゼの作用により、生合成されていると推測された。そこで、菌破砕液を用いて、グリオキシル酸とアセチルCo-A、NADPを反応させた結果、ポリリンゴ酸の生合成を確認することができた。以上の結果から、ポリリンゴ酸の合成経路はグリオキシル酸経路の中間化合物リンゴ酸Co-Aを経て合成されていることが実証することできた。ii)Hormonema dematioides CBS128.64株を用いて不織布表面培養を行うことにより、菌体の迅速な培養が行えることが判明した。さらに、この培養手法を前培養として気泡塔型バイオリアクターを用いて培養を行った結果、約3日間の培養で50g/Lのポリリンゴ酸を発酵生産できることがわかった。この値は通常の通気撹搾型バイオリアクターを用いた場合の約5倍で、その生産性は15倍に向上させることができた。

This study で は, decomposability を have す る straight lock の water-soluble ポ リ エ ス テ ル で あ り, さ ら に side chain に chemically modified が may な カ ル ボ キ シ ル を has an す る new rules な born in vivo decomposition 収 absorption polymer (ポ リ リ ン ゴ acid) を Hormonema genera に す る カ ビ を with い て sharper rate に production さ せ る こ と を beg し 検 た. そ の た め に, now ま で unknown で あ る ポ リ リ ン の ゴ acid biosynthesis 経 road の interpret と, ポ リ リ ン ゴ acid production の た め の cultivation technique に つ い て beg し 検 た. Specifically, に に for the year 2017 に the following two に points に are related to て検 for <s:1> た. I) Hormonema dematioides CBS128.64 の strains cultured cells を with い て TCA loop に masato even す る enzyme activity を beg し 検 た results, イ ソ ク エ ン acid デ ヒ ド ロ ゲ ナ ー ゼ の active が weak く, イ ソ ク エ ン acid リ ア ー ゼ の が extremely active め て strong い こ と. ま た, リ ン ゴ acid シ ン テ タ ー ゼ が の activity is very strong に い こ と が.at し た. こ れ ら の results か ら, ポ リ リ ン ゴ acid は, グ リ オ キ シ ル acid 経 road の intermediate compound で あ る リ ン ゴ acid Co - A を 経 て ポ リ リ ン ゴ acid シ ン テ タ ー ゼ の role に よ り, biosynthesis さ れ て い る と speculation さ れ た. そ こ で, bacteria 砕 liquid を with い て, グ リ オ キ シ ル acid と ア セ チ ル Co - A, NADP を anti 応 さ せ た results, ポ リ リ ン の ゴ acid biosynthesis を confirm す る こ と が で き た. Results above の か ら, ポ リ リ ン ゴ acid synthetic 経 の way は グ リ オ キ シ ル acid 経 road の intermediate compound リ ン ゴ acid Co - A を 経 て synthetic さ れ て い る こ と が card be す る こ と で き た. Ii) Hormonema dematioides CBS128.64 を strains with い て nonwoven fabric surface culture line を う こ と に よ り の な develop rapidly, bacteria が line え る こ と が.at し た. さ ら に, こ の cultivation technique before を と し て 気 bubble column type バ イ オ リ ア ク タ ー を with い て line cultivate を っ た results, about 3 day の cultivation で 50 g/L の ポ リ リ ン ゴ acid を 発 yeast production で き る こ と が わ か っ た. こ の numerical は usually の tong 気 撹 suck type バ イ オ リ ア ク タ ー を with い た で の about 5 times, そ の productive は 15 times に upward さ せ る こ と が で き た.

项目成果

Biosynthesis of Polymalate by Sydowia polyspora

Sydowia polyspora 生物合成聚苹果酸

• 发表时间: 2006
• 期刊: Biotechnology Letters Vol.28
• 作者: 野村琴広他;野村琴広他;野村琴広他;H.Kawamura;小畠秀和;湊 出;福山博之;小畠秀和;箱守 明;楠 信哉;K.Nakagawa
• 通讯作者: K.Nakagawa