低温域温度応答抗体の開発とそのアフィニティ沈殿法による免疫特異的結合蛋白質の精製

低温响应抗体的开发以及使用亲和沉淀纯化免疫特异性结合蛋白

• 批准号: 11750685
• 负责人: 星野 一宏
• 金额: $ 1.41万
• 依托单位: University of Toyama
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1999
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1999 至 2000
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-11750685/
• 关键词: 温度刺激応答性高分子; ヒト免疫グロブリンG; Protein A; 免疫特異的結合蛋白質; アフィニティ沈殿法; ヒト免疫グロブリン'G

4℃という生化学物質の精製に適した温度でアフィニティ精製を行うことのできる新規な温度応答型抗体を開発し、この抗体を利用するためのバイオプロセスを開発するために、低温域温度応答性高分子(Poly-acryloyl piperazine)を開発し、この高分子体へ多くのIgGのFc領域を結合させたアフィニティ吸着体を調製した。本年度はこの吸着体を可溶状態で使用し、黄色ブドウ状細菌の破砕物から沈澱画分を分離することなく直接細胞壁に存在するProtein Aを吸着させ、温度の上昇により吸着体を不溶化させ、Protein Aを効率よく高純度に精製することを検討した。平成12年度に行った内容を記す。1)低温域温度応答抗体の調製昨年度、調整した低温域温度応答型高分子Poly(AP-co-MA)中の側鎖に存在するカルボキシル基と、Papainによる調製したヒト免疫グロブリンG(IgG)のFc領域を水溶性カルボジイミドを用いた酸アミド結合により、低温域温度応答型抗体を調製した。2)アフニティ吸着体としての性質調製した低温域温度応答型抗体のProtein Aに対する吸着・解離特性を評価し、本抗体の特性を明らかにする。Protein Aの濃度は酵素免疫測定法(ELISA)により測定した。さらに、抗体に結合したProtein Aの解離方法について検討し、このアフニティ吸着体が繰り返し利用可能であることを示した。3)アフィニティ沈澱法への利用低温域温度応答型抗体を利用したアフィニティ沈澱法を開発し、Protein Aの分離・精製の省プロセス化を計った。その結果、4℃の可溶状態においてProtein Aとの吸着を行った後、粗試料溶液の温度を10℃に上昇させることにより不溶化させ、目的物質であるProtein Aを沈殿として回収した。この後、この沈殿に解離剤を添加することによりProtein Aを溶出させ、さらに、低温域温度応答型抗体は再び溶解させことにより再利用可能なプロセスを構築できた。

4 ℃ と い う biochemical substance の refined に optimum し た temperature で ア フ ィ ニ テ ィ refined を line う こ と の で き る new rules な temperature 応 answer type antibody を 発 し, こ の antibody を using す る た め の バ イ オ プ ロ セ ス を open 発 す る た め に temperature, low temperature domain 応 a polymer (Poly real - acryloyl Piperazine) を open 発 し, こ の polymer body へ more く の の IgG Fc fields を さ せ た ア フ ィ ニ テ ィ sorption body を modulation し た. This year は こ の sorption body を soluble state で use し, yellow ブ ド の broken 砕 ウ shape bacteria content か ら precipitates draw points を separation す る こ と な く direct cell wall に exist す る Protein A を sorption さ せ, temperature rising の に よ り sorption body を don't melt さ せ, Protein A を sharper rate よ く high-purity に refined す る こ と を beg し 検 た. The content of った in the に line of heisei 12: を record す. 1) low temperature field temperature 応 antibody の modulation yesterday a year, adjust し た 応 answer type low temperature field temperature polymer Poly real (AP - co - MA) there are の side lock に す る カ ル ボ キ シ ル と, Papain に よ る modulation し た ヒ ト immune グ ロ ブ リ ン G (IgG) の Fc field を water-soluble カ ル ボ ジ イ ミ ド を with い た acid ア ミ に ド union Youdaoplaceholder0 よ, low-temperature domain temperature 応, antibody-type を modulation, た. 2) ア フ ニ テ ィ sorption body と し て の nature modulation し た type low temperature field temperature 応 answer antibody の Protein A に す seaborne る sorption, dissociation characteristic を review 価 し, the antibody の を features Ming ら か に す る. The Protein A <s:1> concentration is determined by enzyme immunoassay (ELISA)によ た and た. さ ら に, as well as the combination of antibody に し た Protein A の dissociation method に つ い て beg し 検, こ の ア フ ニ テ ィ sorption body が Qiao り return し may use で あ る こ と を shown し た. 3) ア フ ィ ニ テ ィ precipitates method へ の using low temperature field temperature 応 answer type antibody を using し た ア フ ィ ニ テ ィ precipitates method を open 発 し separation, Protein A の, refined の province プ ロ セ ス change を meter っ た. そ の results, 4 ℃ の soluble state に お い て Protein A と の sorption を line っ た の, coarse sample solution after 10 ℃ temperature を に rise さ せ る こ と に よ り don't melt さ せ, purpose material で あ る Protein A を Shen Dian と し て back 収 し た. , after こ の こ の Shen Dian に dissociation tonic を add す る こ と に よ り dissolubility Protein A を さ せ, さ ら に temperature, low temperature domain 応 A dissolution さ antibody は again び せ こ と に よ り reuse may な プ ロ セ ス を build で き た.

项目成果

Kazuhiro Hoshino: "Affinity Preciptitation of Protein A Using a New Thermo-Responsive IgG"Bioseparation. 10. (2000)

Kazuhiro Hoshino：“使用新型热响应 IgG 进行蛋白 A 的亲和沉淀”生物分离。

Kazuhiro Hoshino: "Stimuli Responsive Polymers in Bioprocessing"Hardwood Academic Publishers GMBH, The Netherlands. 458 (2000)

Kazuhiro Hoshino：“生物加工中的刺激响应聚合物”Hardwood 学术出版社 GMBH，荷兰。

Kazuhiro Hoshino: "Adsorption and Desorption Properties of Metal Ions Using a Sodium Polyacrylate Gel"The 9th International Symposium of Fine Chemistry and Functional Polymers. 9. 337-339 (1999)

Kazuhiro Hoshino：“使用聚丙烯酸钠凝胶对金属离子的吸附和解吸性能”第九届国际精细化学与功能聚合物研讨会。

Kazuhiro Hoshino: "Preparation of a New Thermo-Responsive Adsorbent with NAD+ and Its Application to Affinity Precpitation"The 5th Asia-Pacific Biochemical Engineering Conference 1999. 5. 131 (1999)

星野一宏：“NAD新型热响应吸附剂的制备及其在亲和沉淀中的应用”第五届亚太生化工程会议1999. 5. 131（1999）

Kazuhiro Hoshino: "Desorption properties of preadsorbed methal ions from sodium polyacrylate gel"Journal of Chemical Engineering of Japan. 34. (2001)

Kazuhiro Hoshino：“聚丙烯酸钠凝胶中预吸附金属离子的解吸特性”日本化学工程学报。