糖蛋白質細胞内輸送における結合・解離機構を持つ新規糖鎖認識分子の創製

创建具有细胞内糖蛋白运输结合和解离机制的新型碳水化合物识别分子

• 批准号: 16657029
• 负责人: 山本 一夫
• 金额: $ 2.24万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2004
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2004 至 2005
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-16657029/
• 关键词: カーゴレセプター; レクチン; VIP36; ERGIC-53; pH依存性; MCFD2; 結合・解離

VIP36は中性では糖結合が見られないが、酸性になるに従って強い結合能が観察される。この理由は、おもにVIP36分子の会合によって引き起こされることが超遠心分析およびゲルろ過等の分析で既に明らかにしている。そこで類似のカーゴレセプターERGIC-53についても、同様に可溶性の組換えタンパク質を調製しフローサイトメトリーで糖結合活性を調べた。ERGIC-53と結合する新規分子MCFD2が存在し、MCFD2と結合することで初めて糖結合活性が獲得されることが示された。C末端側のEFハンド構造内に点変異を持つ2種類のMCFD2変異体は、ERGIC-53との結合能が100分の1に減少しており、糖結合活性を誘導することはできなかった。さらに表面プラズモン共鳴を用いて、ERGIC-53とMCFD2の結合定数を種々のpH並びにCa濃度に関して詳細に調べたところ、pH7.0からpH6.0の範囲で、0.2〜0.1mM CaCl2存在下で結合定数が1/100に減少した。小胞体内からゴルジ体へ移行する際の局所的なCa濃度変化によりERGIC-53からMCFD2が解離し、リガンドの糖を遊離するものと考えられた。VIP36に相同性を持つVIPLに関しても糖結合活性を検出することができたが、pHによる大きな差はなく、Caで多少変化が見られた。VIP36はゴルジ体を中心に広く小胞体や細胞表面に、一方ERGIC-53は小胞体からシスゴルジ体に、またVIPLは小胞体に限局している。異なる守備範囲において、VIP36は単量体から多量体形成により、一方ERGIC-53はMCFD2との会合によりそれぞれ活性調節がなされており、これら分子の挙動が細胞内オルガネラのpHやCa濃度に連関していることから、リガンドの結合・解離機構を2つの手法で導入できる可能性が示唆された。

The combination of VIP36 neutral sugar and acid glucose can be used to detect the concentration of glucose. The reason and the reason why the VIP36 molecules will meet will lead to a clear understanding of the results of the analysis. The sample size is similar to that of the soluble group, which is the same as that of the ERGIC-53. The combination of ERGIC-53 and novel molecule MCFD2, the presence of MCFD2, the activity of primary glucose binding, the activity of glucose binding, the activity of glucose binding, and the activity of glucose binding. At the C-terminal, the EF device is designed to maintain the same kind of MCFD2 body, the combination of ERGIC-53, and the activity of sugar binding can lead to the reduction of concentration. On the surface of the market, the number of pH is determined by the combination of ERGIC-53 and MCFD2, and the number of Ca is different. The pH6.0 range of pH7.0 is different, and the lower limit of 0.2~0.1mM CaCl2 is less than 100. In the small cell, the body is transferred to the local Ca, the ERGIC-53 is separated from the MCFD2, and the sugar is isolated from the cell. VIP36 homology holds that the activity of the combination of VIPL and glucose makes it possible to determine the difference between pH and Ca, and the difference between them. VIP36 body center, cell surface, ERGIC-53 cell body, VIPL body, localized cell surface. The equipment is sensitive, the VIP36 is multiplicative, and one of the ERGIC-53 MCFD2 is used to detect the activity of the target, the molecular marker of the cell, the pH of the Ca, the link of the system, the combination of the isolation mechanism and the mechanism of isolation, and the possibility of detection.

项目成果

Killer cell lectin-like receptor G1 binds three members of the classical cadherins to inhibit NK cell cytotoxicity.

杀伤细胞凝集素样受体 G1 结合经典钙粘蛋白的三个成员，抑制 NK 细胞的细胞毒性。

• 发表时间: 2006
• 期刊: J.Exp.Med. 203
• 作者: Takagaki;Kentaro;M.Ito
• 通讯作者: M.Ito

Ribosomal protein S18 identified as a cofilin-binding protein by using phage display library.

通过噬菌体展示文库鉴定核糖体蛋白 S18 为肌丝蛋白丝切蛋白结合蛋白。

• 发表时间: 2004
• 期刊: Bio Mol.Cell.Biochem 262
• 作者: Kusui K.;Sasaki H.;Adachi R.;Matsui S.;Yamamoto K.;Yamaguchi T.;Kasahara T.;Suzuki K.
• 通讯作者: Suzuki K.

B-la cell origin of the murine B lymphoma line BCL1 characterized by surface markers and bacterial reactivity of its surface IgM.

鼠B淋巴瘤系BCL1的B-1a细胞起源，其特征在于其表面IgM的表面标记和细菌反应性。

• 发表时间: 2005
• 期刊: Immunology Lett. 98
• 作者: S.Koganei;M.Ito;K.Yamamoto;N.Matsumoto;S.Koganei
• 通讯作者: S.Koganei

B-la cell origin of the murine B lymphoma line BCL1 characterized by surface markers and bacterial reactivity of its surface IgM

鼠 B 淋巴瘤系 BCL1 的 B-la 细胞起源，其特征在于其表面 IgM 的表面标记和细菌反应性

• 发表时间: 2005
• 期刊: Immunology Lett. 98
• 作者: N.Kawasaki;I.Matsuo;K.Totani;D.Nawa;N.Suzuki;D.Yamaguchi;N.Matsumoto;Y.Ito;K.Yamamoto;M.Kajikawa;S.Koganei
• 通讯作者: S.Koganei

Modulating the actions of NK cell-mediated xytotoxicity using lipid-PNG (n) and inhibitory recelptor-specific antagonistic peptide conjugates.

使用脂质-PNG (n) 和抑制性受体特异性拮抗肽缀合物调节 NK 细胞介导的细胞毒性作用。

• 发表时间: 2005
• 期刊: Biotechnol. Prog. 21
• 作者: N.Kawasaki;I.Matsuo;K.Totani;D.Nawa;N.Suzuki;D.Yamaguchi;N.Matsumoto;Y.Ito;K.Yamamoto;M.Kajikawa;S.Koganei;C.A.Lyeyoung
• 通讯作者: C.A.Lyeyoung