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作物組織における遺伝子発現過程の可視化に関する研究

作物组织基因表达过程可视化研究

基本信息

批准号：
16658008
负责人：
三宅博
金额：
$ 2.24万
依托单位：
Nagoya University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2004
资助国家：
日本
起止时间：
2004 至 2006
项目状态：
已结题

项目摘要

1・超薄切片の作製が不可能である硬質のイネ完熟種子を用いて、割断面に金コロイド標識抗体を処理し、走査型電子顕微鏡で観察して貯蔵タンパク質の分布を観察する方法を検討しほぼ完成させた。これまでは洗浄を強くすると洗浄中に表面構造が脱落し、洗浄を弱くすると非特異的な標識が起こる問題があったが、抗体希釈液およぴ洗浄液の牛血清アルブミンの濃度を1%に高めることにより、弱い洗浄でも非特異的結合を抑制することができた。この手法によって、プロテインボディIIに局在するグルテリンに対する抗体を、特異的にプロテインボディIIに結合させることができるようになった。2.イネ成熟葉について、in situハイブリダイゼーション法(ISH法)を完成させることができた。イネ葉の成長にともなうRubiscoおよぴLHCIIの遺伝子であるcabあの発現をISH法で調べ、維管束鞘では初期にこれらの遺伝子発現が停止してしまうが、これらのタンパク質は成熟葉でも保持されていることを免疫電子顕微鏡法で明らかにした。またラミナジョイントを欠損している準同質遺伝子系統を用い、野生株と比較することにより、ラミナジョイントでは葉肉組織と維管束鞘組織が備わっているにもかかわらず、光合成遺伝子の発現が抑制されていることを明らかにした。さらに塩ストレスによって齢の進んだ部位から順にRubiscoの遺伝子発現が消失することを明らかにした。3.本研究によって、イネ葉身の成長から老化までの全過程におけるRubisco遺伝子の発現とRubiscoタンパク質の動態を明らかにし、葉緑体の光合成活性の指標であるPAMによる螢光特性との関係を対応づけることができた。

1. It is impossible to make ultra-thin slices, and the hard and ripe seeds are made with いて and cut surface に金コロイド to mark the antibody を place The analysis, walk-through type electronic microscopic examination of the distribution of the quality of the storage system and the method of inspection have been completed.これまではclean をstrong くするとclean medium にsurface structure がoff し ,washed をweak くするとnon-specific なidentification がrise こるproblem があったが ,antibody hope Bovine serum およぴ cleaning solution アルブミンのconcentration 1% high めることにより, weak い cleansing and non-specific binding を inhibition することができた.この法によって、プロテインボディIIに区在するグルテリンに対するAbを、Special combination of にプロテインボディIIにさせることができるようになった. 2. イネripe leaf について、in situハイブリダイゼーション method (ISH method) をComplete させることができた.イネ叶のgrowthにともなうRubiscoおよぴLHCIIの伝子であるcabあの発成をISH法で Adjustべ、vascular bundle sheathではInitial stageにここれらのタンパク性は成The mature leaves are kept and the immune electron microscopy method is maintained.またラミナジョイントを无码しているquasi-homogeneous legacy subsystemをComparing the use of い and wild strains, することにより, ラミナジョイントではThe mesophyll tissue and vascular bundle sheath tissue are prepared and the photosynthetic genes are suppressed.さらに塩ストレスによって齢の入んだpartsから顺にRubiscoの伝子発appears and disappearsすることを明らかにした. 3. The whole process of this study is the growth and aging of the leaves and the body of the leaves. The whole process of Rubisco remains.パク性のdynamic を明らかにし, chloroplast のphotosynthetic activity indicator であるPAM によるfluorescence characteristics とのrelations を対応づけることができた.