改変型アデノウイルスベクターを用いたin vivo胎盤毒性評価系の構築

改良腺病毒载体构建体内胎盘毒性评价体系

• 批准号: 16659039
• 负责人: 中西 剛
• 金额: $ 1.79万
• 依托单位: Osaka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2004
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2004 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-16659039/
• 关键词: アデノウイルスベクター; 胎盤; 発生毒性; 内分泌撹乱作用; 種差

本研究では、医薬品等の化学物質の毒性や副作用の標的臓器として胎盤に注目し、いかなる胎盤機能(遺伝子)が変化した場合に、胎児に対してどのような影響が及ぶのかをin vivoで簡便に検討を行うことが可能な評価系の構築を最終目標としている。そこで、化学物質により変動が認められた胎盤中の遺伝子を、胎盤特異的に発現させて胎児への影響を検討するために、胎盤特異的に遺伝子を発現させるシステムの構築を比較的に容易にin vivoでの遺伝子導入が可能なアデノウイルスベクター(Ad)を用いることで行った。齧歯類胎盤のgiant cellに特異的発現するplacental lactogen(PL)IおよびIIのそれぞれ転写開始点から上流-280bpと-2643bpのDNA断片をマウスのゲノムからクローニングし、下流にルシフェラーゼ発現遺伝子を連結してレポーター遺伝子を作成した。これらの遺伝子発現をラット胎盤細胞Rcho-1細胞とマウス繊維芽細胞株であるL929細胞に発現させて比較検討したところ、プロモーター依存的にRcho-1細胞でのみ高い発現を示すことが明らかとなった。Adを用いて胎盤機能修飾モデル動物の作成を行うために、Adの胎盤への遺伝子導入効率について検討を行った。しかし静脈内投与では、野生型のAd(WT-Ad)は、肝臓での発現が顕著に高く、胎盤での発現は肝臓と比較してわずか0.1%程度であったが、この問題を解決するためにウイルスのファイバー部分にRGD配列を持たせた改変型アデノウイルスベクター(RGD-Ad)を用いて検討を行ったところ、胎盤での発現はWT-Adの約100倍に上昇した。これにより胎盤への簡便な遺伝子導入が可能となり、胎盤の遺伝子変動に伴う発生毒性評価を行うことができると考えられる。

In this study, the toxicities and side effects of chemicals such as pharmaceuticals, pharmaceuticals, and other chemicals, such as toxicology, side effects, and so on, can be used in the treatment of toxic and side effects of chemicals in this study. in this study, the toxicity and side effects of chemicals, such as toxicities, side effects and side effects of toxicology and side effects of chemical substances, such as toxicities, side effects and side effects of chemicals, such as toxicities, side effects and side effects of chemicals, such as toxicities, side effects and side effects of chemicals, such as toxicities, side effects and side effects of chemicals in this study, such as toxic effects, side effects and side effects of chemicals, such as toxicities, side effects and side effects of chemicals in this study, such as toxicology, side effects and side effects of toxicology and side effects of chemicals in this study, such as toxicology, side effects and side effects. It is easy to use the in vivo device that makes it easier to get into the market. It is possible to use the Ad system to make sure that it is possible to use the device to make sure that it is not possible to use the device. The current placental lactogen (PL) I of the same type of fetus is sensitive to II. The starting point of the write start point is the upstream-280bp-2643bp segment of the DNA fragment. This is not the case. The Rcho-1 cell line, the L929 cell line, the Rcho-1 cell line, the cell line, the cell line. The Ad machine can be used to repair the mechanical equipment of the tire, and the transfer rate of the Ad tire can be adjusted to make sure that the transfer rate is different. The results show that there is no significant difference between the two groups in the field of intravenous injection, wild type Ad (WT-Ad), wild type, liver, liver and liver. The WT-Ad of the fetus is about 100 times higher than that of the fetus. The baby was not allowed to get into the foetus, and the baby was not allowed to enter the placenta. The child movement was accompanied by the toxicity of the drug.