核内受容体発現機序の系統発生学的・医学的解析

核受体表达机制的系统发育和医学分析

基本信息

批准号：
16659093
负责人：
内藤眞
金额：
$ 2.11万
依托单位：
Niigata University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2004
资助国家：
日本
起止时间：
2004 至 2005
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-16659093/
关键词：
HNF4α 核内受容体抗体免疫組織学 Western blot 脊椎動物

项目摘要

核内受容体は48個存在するが、その組織発現とその調節機構は良い抗体がないため、十分な解明をみていない。申請者はペルセウス社と共同で本年度までに核内受容体48個全てに対する抗体を作製した。その成果として凍結切片に加えて、ヒトパラフィン切片に反応する抗体約20種が得られた。P1,P2プロモーター由来の異なったHNF4αのisoformを認識する抗体も3種得られ、これらisoformの組織・細胞特異的発現と腫瘍における変化を明らかにした(J Pathol 2006)。LXRα抗体によって、マクロファージの動脈硬化における脂質代謝での役割の解析も行った(Arterioscler Thromb Vasc Biol 2005)。これらの検索の中でこの抗体は免疫組織学的に爬虫類、両生類、魚類など脊椎動物の免疫染色に利用可能であることを発見した。次いで、この抗体がWestern blotでそれら動物の蛋白と反応することも確認した。さらに、エッセン大学Dr.G.Ryffelより分与されたXenopus laevis由来HNF4αのcDNAを含んだplasmidをトランスフェクトしたCOS-1細胞にHNF4αP1抗体がWestern Blot、免疫染色、蛍光染色で反応することを明らかにした。蛍光免疫染色、共焦点レーザー顕微鏡による観察では、HNF4αが核内のクロマチン領域に局在し、LXRαは核小体に局在することも明らかにした。広範な動物種に反応する抗体は極めて稀であり、今後医学のみならず、生物学分野で広く活用されることが期待される。この研究成果は(Jiang S, Naito M et al.:Immunohistochemical detection of hepatocyte nuclear factor-4α in vertebrates)として投稿中である。

有48种核受体，但由于缺乏良好的抗体，组织表达及其调节机制，因此尚未完全了解。申请人与Perseus合作，已与今年共同生产了所有48种核受体的抗体。结果，除了冷冻切片外，还获得了大约20种对人类石蜡切片反应的抗体。还获得了三种抗体，这些抗体识别源自P1和P2启动子的HNF4α的不同同工型，从而揭示了这些同工型的组织和细胞特异性表达以及肿瘤的变化（J Pathol 2006）。 LXRα抗体还分析了巨噬细胞脂质代谢在动脉粥样硬化中的作用（动脉杆菌血栓Vasc Biol 2005）。在这些搜索中，发现这种抗体可用于免疫组织学可用于免疫抑制脊椎动物，例如爬行动物，两栖动物和鱼类。然后证实，该抗体与蛋白质中的蛋白质反应。此外，据揭示了HNF4αP1抗体与蛋白质印迹，免疫染色和荧光染色反应于用含有Xenopus laevis的HNF4α的质粒转染的cos-1细胞，由埃森大学的G. Ryffel博士分配。共聚焦激光显微镜的荧光免疫染色和观察表明，HNF4α位于核中的染色质区域，LXRα定位于核仁。对广泛动物物种反应的抗体极为罕见，预计不仅在医学中而且在生物学领域都被广泛使用。目前，该研究发现是作为脊椎动物中肝细胞核因子-4α的免疫组织化学检测。

项目成果

期刊论文数量（18）

专著数量（0）

科研奖励数量（0）

会议论文数量（0）

专利数量（0）

Differentiation and function of Kupffer cells

DOI：
10.1007/s00795-003-0228-x
发表时间：
2004-03-01
期刊：
Medical Electron Microscopy
影响因子：
0
作者：
Naito, Makoto;Hasegawa, Go;Yamamoto, Takashi
通讯作者：
Yamamoto, Takashi

Hepatocyte-specific Pten deficiency results in steatohepatitis and hepatocellular carcinomas.

DOI：
10.1172/jci20513
发表时间：
2004-06
期刊：
The Journal of clinical investigation
影响因子：
0
作者：
Y. Horie;A. Suzuki;E. Kataoka;Takehiko Sasaki;K. Hamada;J. Sasaki;K. Mizuno;G. Hasegawa;
通讯作者：
Y. Horie;A. Suzuki;E. Kataoka;Takehiko Sasaki;K. Hamada;J. Sasaki;K. Mizuno;G. Hasegawa;

AIM inhibits apoptosis of T cells and NKT cells in Corynebacterium-induced granuloma formation in mice