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両アレル変異を有するES細胞ライブラリーの構築と遺伝子探索

双等位突变ES细胞文库构建及基因搜索

基本信息

批准号：
16659102
负责人：
竹田潤二
金额：
$ 2.3万
依托单位：
Osaka University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2004
资助国家：
日本
起止时间：
2004 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-16659102/
关键词：
ES細胞 Bloom遺伝子テトラサイクリン両アレル ES細胞ライブラリー

项目摘要

ES細胞を利用すると、任意の遺伝子を欠損させた遺伝子改変マウスを作製することが可能であるばかりでなく、試験管内であらゆる組織に分化可能である。本研究では、ES細胞において相同組み換えを高頻度に起こさせるために、Bloom遺伝子をテトラサイクリンで制御できるようにした。そうすることにより、片アレルに変異が導入された細胞がテトラサイクリンを添加することにより、両アレルに変異を有する細胞に転換し、様々な変異を両アレルに有するようなES細胞ライブラリーが構築された。実際に両アレル変異を有するクローンを取得出来るか確かめた。変異形質としては、膜表面に発現するGPI-アンカー型蛋白欠損クローンを選択した。このシステムの良いところは、GPI-アンカー生合成に関わっている遺伝子が20数種類知られていてそれらはゲノム全体に均一に分布していることである。しかも、それら生合成に関わるどれか一つの遺伝子が欠損した時には、膜表面のGPI-アンンカー欠損という同じ表現型を示し、欠損細胞はエアロリジン耐性細胞として生き残ってくる特徴がある。結果は既存の23種類の遺伝子の内、12種類の遺伝子変異をもつ細胞株が取得できたので、システムの有効性が証明できた。(Yusa, K., et al.:Genome-wide phenotype analysis in ES cells by regulated disruption of the Bloom's syndrome gene. Nature 429, 896-899, 2004)

ES cells can be differentiated by using random genes and by modifying the genes. In this study, ES cells were isolated from the same group of cells with high frequency. The cells were transformed into cells, and the cells were transformed into cells. When you're in the middle of something, you're in the middle of something. GPI-1 type protein was found on the surface of the membrane. In this case, the GPI-1 gene was synthesized in 20 different species and distributed uniformly in the whole population. The phenotype of GPI-1 on the membrane surface is the same as that of GPI-1 on the surface of GPI-1 on the membrane surface. The results showed that there were 23 kinds of genes and 12 kinds of genes with different cell lines. (Yusa, K., et al.: Genome-wide phenotype analysis in ES cells by regulated disruption of the Bloom's syndrome gene. Nature 429, 896-899, 2004)

项目成果

期刊论文数量（6）

专著数量（0）

科研奖励数量（0）

会议论文数量（0）

专利数量（0）

Target-site preferences of Sleeping Beauty transposons

DOI：
10.1016/j.jmb.2004.09.086
发表时间：
2005-02-11
期刊：
JOURNAL OF MOLECULAR BIOLOGY
影响因子：
5.6
作者：
Liu, GY;Geurts, AM;Hackett, PB
通讯作者：
Hackett, PB

Angiotensin-converting enzyme is a GPI-anchored protein releasing factor crucial for fertilization.

DOI：
10.1038/nm1179
发表时间：
2005-03
期刊：
Nature medicine
影响因子：
82.9
作者：
Kondoh G;Tojo H;Nakatani Y;Komazawa N;Murata C;Yamagata K;Maeda Y;Kinoshita T;Okabe M;Taguchi R;Takeda J
通讯作者：
Takeda J

Genome-wide phenotype analysis in ES cells by regulated disruption of the Bloom's syndrome gene.

通过调节破坏布卢姆综合征基因对 ES 细胞进行全基因组表型分析。