T細胞の分化および活性化に対するGPIアンカー型蛋白の役割の解析

GPI锚定蛋白在T细胞分化和激活中的作用分析

• 批准号: 08839015
• 负责人: 竹田 潤二
• 金额: $ 1.34万
• 依托单位: Osaka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-08839015/
• 关键词: GPIアンカー型蛋白; Tリンパ球; pig-a; コンディショナルジーンターゲッティング; Cre; loxp

GPIアンカーは、真核細胞に広く分布しGPIアンカー型蛋白を細胞膜表面につなぎ止めるための必須の構造であり、種間でその構造はよく保存されている。GPIアンカー生合成に必須であるpig-a遺伝子破壊マウスは致死であり、マウス個体発生におけるGPIアンカー型蛋白の重要性が指摘されている。Thy-1,Ly6で代表されるGPIアンカー型蛋白が、多数発現しているTリンパ球の成熟機構あるいは活性化にはたしている役割をコンディショナルジーンノックアウトを利用し個体レベルで解析した。(1)胸腺Tリンパ球の選択機構に対するGPIアンカー型蛋白の役割Pig-a遺伝子にloxP部位を挿入したマウス(Piga-loxP)と未分化T細胞から遺伝子発現を誘導できるLckプロ-モーターの下流にCreを連結したマウス(Lck-Cre)マウスを交配させた。胸腺Tリンパ球を解析すると、交配された変異マウスでGPIアンカー型蛋白は欠損していたが、完全欠損でない細胞も混在していた。正と負の選択機構は正常マウスに比べ差がみられなかった。(2)末梢成熟Tリンパ球の活性化あるいは細胞死に対する影響変異マウスにおいて末梢成熟Tリンパ球のGPIアンカー型蛋白は完全欠損していた。この細胞を種々のマイトジエンで刺激した(ConA,抗CD3,PMA+Ionomycine)。これらの刺激に対して、変異細胞は正常の反応を示した。さらにin vivoにSEB(staphylococcus enterotoxinB)を投与することで、in vivoに於けるTリンパ球の活性化とそれに続く細胞死を観察した。ここでも変異細胞は、正常細胞と同じ程度に、活性化とそれに続く細胞死が観察された。以上に結果は、多数発現しているGPIアンカー型蛋白はTリンパ球の成熟機構あるいは活性化に必須でないことを示している。

GPI protein, eukaryotic cell protein distribution GPI protein type protein on the cell membrane surfaceつなぎ出めるためのRequired structure であり, interspecies でそのstructure はよく to save されている. GPIアンカー生综合に必であるpig-a伝子波壊マウスは死であり, the importance of GPI アンカー-type protein in the development of individual diseases is pointed out by されている. Thy-1, Ly6 represents the GPI type protein and most of the mature proteinsいはactivationにはたしている伒コンディショナルジーンノックアウトをutilizationし Individual レベルでanalyticsした. (1) Thymus T リンパの选択Mechanism に対するGPI アンカーtype protein の伮 Cut Pig-a 伝子 にloxP site を INSERT したマウス (Piga-loxP ) and undifferentiated T cells are induced by the induction of undifferentiated T cells Indecent にCreをconnectionしたマウス(Lck-Cre)マウスをMATINGさせた. Thymus Tリンパをanalysisすると、Matingされた変differentマウスでGPIアンThe type of protein that is damaged is the same, and the cells that are completely damaged are mixed together. The selection mechanism of positive and negative is normal and the difference is better than normal. (2) Activation of terminal mature T cells, cell death, and different effects on the activation of T cellsにおいてTerminal mature Tリンパball のGPIアンカーtype protein は is completely missing していた.このをkind of 々のマイトジエンでstimulationした (ConA, anti-CD3, PMA+Ionomycine). It stimulates the stimulation and changes the abnormal cells to the normal reaction. SEB (staphylococcus enterotoxinB) is injected into the body and activates the cells in vivo. The degree of homogeneity of different cells and the degree of homology of normal cells, and the detection of activation and death of cells. As a result of the above, it is necessary to activate the mature mechanism of GPI peptide type protein and T-cell protein in many cases.

项目成果

Minoru Takahashiet al.: "PIG-B,a membrane protein of the endoplasmic reticulum with a large lumenal domain,is involved in transferring the third mannose of the GPI anchor." The EMBO Journal. 15・16. 4254-4261 (1996)

Minoru Takahashiet al.：“PIG-B 是一种具有大腔域的内质网膜蛋白，参与 GPI 锚定的第三个甘露糖的转移。” EMBO 杂志 15・16。

Ohishi,K.: "Cloning and characterization of the murine GPI anchor synthesis gene Pigf,a homologue of the human PIGF gene." Genomics. 34. 340-346 (1996)

Ohishi,K.：“小鼠 GPI 锚定合成基因 Pigf（人类 PIGF 基因的同源物）的克隆和表征。”

Reika Watanabe et al.: "PIG-A and PIG-H,which participate in glycosyl phosphatidyl-inositol anchor biosynthesis,form a protein complex in the endoplasmic reticulum." Journal of Biological Chemistry. 271・43. 26868-26875 (1996)

Reika Watanabe 等人：“参与糖基磷脂酰肌醇锚生物合成的 PIG-A 和 PIG-H 在内质网中形成蛋白质复合物。”Journal of Biological Chemistry 271·43 (1996)。

Norimitsu Inoue et al.: "PIG-C,one of the three human genes involved in the first step of glycosylphospha-tidylinositol biosynthesis is a homologue of Saccharomyces cerevisiae GPI2." Biochemical and Biophysical Research Communications. 226. 193-199 (1996)

Norimitsu Inoue 等人：“PIG-C 是参与糖基磷脂酰肌醇生物合成第一步的三个人类基因之一，是酿酒酵母 GPI2 的同源物。”