NK細胞/樹状細胞ハイブリドによる新規癌免疫細胞療法の開発

A.NK細胞と樹状細胞(DC)の融合細胞の作成マウス脾臓NK細胞と樹状細胞株の融合細胞(NK-DC Hybrids)の作成A/J(H-2^k)マウス皮膚由来の成熟DC株XS106とA/Jマウス由来脾臓NK細胞をPolyethylene glycol (PEG)法にて癒合させる。我々はすでに、HAT感受性、ネオマイシン耐性のXS106由来の細胞クローン(V2 DC)を樹立している。NK細胞はマウス脾臓細胞からマグネットビーズ(StemStep社)を用いて分離する。NK細胞はHAT耐性、neomycin感受性である。MK-DC Hybridsの選択には我々が開発したdouble selection (HAT+Neomycin)法を用いた。B.NK-DC Hybridsのin vitroの解析Phenotype : DC, NK細胞,NK-DC HybridsにつきphenotypeをFACSで解析し、3者間の発現レベルを検討した。また種々の刺激(LPS, agonistic anti-CD40 Abなど)でそれらの機能分子の発現変化を検討した。抗原提示機能:NK-DC Hybridsは抗原特異的抗原提示能とNK活性がなく、その原因とクローンのスクリーニングをしている。C.Gap juntion(Gj)を介した細胞間相互作用の解析:DCが抗原提示する際に、DC間のGjを介した情報伝達が重要であることを明らかにした。DC-NK Hybridが所属リンパ節内でのDCに抗原を渡し、活性化するのに重要なメカニズムと考え、解析中である。

A.NK細胞と樹状細胞(DC)の融合細胞の作成マウス脾臓NK細胞と樹状細胞株の融合細胞(NK-DC Hybrids)の作成A/J(H-2^k)マウス皮膚由来の成熟DC株XS106とA/Jマウス由来脾臓NK細胞をPolyethylene glycol (PEG)法にて癒合させる。我々はすでに、HAT感受性、ネオマイシン耐性のXS106由来の細胞クローン(V2 DC)を樹立している。NK細胞はマウス脾臓細胞からマグネットビーズ(StemStep社)を用いて分離する。NK細胞はHAT耐性、neomycin感受性である。MK-DC Hybridsの選択には我々が開発したdouble selection (HAT+Neomycin)法を用いた。B.NK-DC Hybridsのin vitroの解析Phenotype : DC, NK細胞,NK-DC HybridsにつきphenotypeをFACSで解析し、3者間の発現レベルを検討した。また種々の刺激(LPS, agonistic anti-CD40 Abなど)でそれらの機能分子の発現変化を検討した。抗原提示機能:NK-DC Hybridsは抗原特異的抗原提示能とNK活性がなく、その原因とクローンのスクリーニングをしている。C.Gap juntion(Gj)を介した細胞間相互作用の解析:DCが抗原提示する際に、DC間のGjを介した情報伝達が重要であることを明らかにした。DC-NK Hybridが所属リンパ節内でのDCに抗原を渡し、活性化するのに重要なメカニズムと考え、解析中である。