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変形性関節症で誘導される軟骨特異的遺伝子CILPのプロモーター解析

骨关节炎诱导的软骨特异性基因CILP的启动子分析

基本信息

批准号：
16659399
负责人：
池田敏之
金额：
$ 1.92万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2004
资助国家：
日本
起止时间：
2004 至 2005
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-16659399/
关键词：
CILP SOX5 SOX6 軟骨分化 p63

项目摘要

1.CILPの成長軟骨における発現パターンの解析前年度作成した抗CILPポリクロナール抗体の特異性をCILPの強制発現系を用いて確認した。N末端側、C末端側の両エピトープにおいてペプチド抗体を作成したが、作成した抗体はウェスタンブロッティングにおいて感度、特異度とも間題なかったため、発生肢において免疫染色を行いその局在をみた。組織レベルの解析と同様CILPの発現は成長軟骨および筋肉に強く認めた。とくに軟骨においては増殖軟骨細胞層から前肥大軟骨細胞層にシグナルが検出され、SOX5/6の発現パターンにオーバーラップしていた。2.CILPの転写活性化に働く新規分子のクローニング前年度にしぼりこんだDSOXRE1を3コピー重ねたDNA配列をベイトにヒト軟骨、マウスエンブリオ由来のcDNAライブラリーを用いてワンハイブリッドアッセイ、およびサウスウェスタンスクリーニングを行って結合転写因子の候補を得た。得られた約30個の候補分子のうちp63とZNF18がCILPのプロモーターを特異的に活性化した。SOX5、SOX6との直接の協調的な作用は明らかではなく、さらに他の分子が介在している可能性が高いが、p63はHeLa細胞に単独でCILP mRNAを誘導可能であるばかりでなく、II型コラーゲン、SOX6、SOX9などさまざまなプロモーターの転写を活性化した。また、ZNF18はCILP以外の軟骨特異的遺伝子への反応性は小さかったが、抗アポトーシス分子であるBCL2のプロモータに高い反応性を示し、このさいp63と協調的に作用した。SOXトリオの抗アポトーシス作用の一部はp63やZNF18との協調作用によって生じている可能性が示された。

1. The specificity of anti-CILP antibody and the stress detection system of CILP were established before the analysis of CILP growth cartilage. N-terminal side, C-terminal side of the antibody preparation, preparation, antibody preparation, sensitivity, specificity, and development of the immune staining process. Tissue analysis and CILP development are related to the growth of cartilage and muscle. In the case of cartilage proliferation, SOX5/6 is present in the cartilage layer. 2. CILP's reactivation of the new molecule in the previous year, DSOXRE1, 3, DNA alignment, cartilage, origin of cDNA, use of the new molecule in combination with the candidate for the reactivation factor. About 30 candidate molecules were obtained, which were specifically activated by CILP. SOX5, SOX6 and direct coordination of the role of the two molecules is not clear, but the possibility of other molecules mediated in the high, p63 HeLa cells alone CILP mRNA induction may be possible, type II, SOX6, SOX9 and other molecules to activate the gene. In addition, ZNF18 has a role in the coordination of anti-BCL 2 and anti-CILP molecules. Part of the anti-corruption effect of SOX is shown by the possibility of coordination between p63 and ZNF18.