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TNFスーパーファミリーを利用した軟骨再生薬開発のための基礎研究

利用TNF超家族开发软骨再生药物的基础研究

基本信息

批准号：
22K09348
负责人：
池田敏之
金额：
$ 2.66万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2022
资助国家：
日本
起止时间：
2022-04-01 至 2025-03-31
项目状态：
未结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22K09348/
关键词：
軟骨分化サイトカイン TNFスーパーファミリー

项目摘要

ヒト間葉系幹細胞を用いたin vitro 軟骨分化モデルの構築を行った。４種類のTNFスーパーファミリー分子LTA、TRAIL、VEGI、GITRLについて293細胞にアデノウィルスベクターを導入パッケージング、発現を確認した。LTAについては、パッケージングに時間がかかり現在効果検証中、VEGIについては発現に問題がありベクターの再構築が必要であった。一方GITRLとTRAILについてはヒトMSCに導入した場合、導入後１週間程度の早期からCOL2A1, SOX6, SOX9など軟骨の初期分化マーカーのmRNA誘導と、ALP染色陽性、alcian blue 染色陽性で示される軟骨基質の産生を認め、強い軟骨誘導能を認めた。とくにGITRLについてはパネルRNAを用いたRT-PCRによる解析で軟骨組織・軟骨細胞にかなり特異的に高発現していることが確認され軟骨分化誘導薬の候補として有望ではないかと考えられた。特異的受容体であるGITRの発現も同様に軟骨特異的であったためGITRのアデノウィルス発現系を作成したところGITRもヒト間葉系細胞を軟骨細胞様に分化させることが明らかになった。GITR/GITRLの組み合わせでさらに軟骨分化は促進された。市販の精製済みGITRLを使用して軟骨分化に必要な濃度を検証したところGITRLは従来の生理的な活性濃度よりかなり高濃度の100 ng/mL程度で軟骨分化誘導を促すことが明らかになった。現在リガンド・リセプターにGFPを挟みこんだ形の強制発現系を作成し恒常活性型の軟骨分化誘導因子としてワークするか検証中である。また末梢血由来の単核球分画にNFkBシグナルの転写因子RELAをアデノウィルスで導入すると間葉系幹細胞様の紡錘形細胞に一部分化することが分かったので、この細胞を増殖させたin vitro軟骨分化モデルを現在作成中である

The cells were divided into in vitro cells by the bone differentiation method. 4. The molecules LTA, TRAIL, VEGI, and GITRL, which are similar to each other, are required to enter the information system and confirm the status of the computer. The LTA alarm is now available, and the VEGI response is now in the event that the problem has been resolved. The early differentiation of COL2A1, SOX6, SOX9 in the early stage of bone differentiation, ALP staining and alcian blue staining showed that the bone matrix of GITRL, TRAIL, SOX9 and GITRL were involved in the early differentiation of bone in the early stage of bone differentiation. ALP staining and alcian blue staining showed that the bone matrix was cultured and the bone guidance was enhanced. This is the first step in the analysis of bone tissue, bone tissue, bone cell, bone tissue, bone tissue, bone tissue The special recipient, GITR, showed that it was the same as that of the bone. It was made into a system of GITR cells, bone cells, differentiation cells, bone cells and bone cells. GITR/GITRL tissue was used to promote bone differentiation. In the market, GITRL is used to induce bone differentiation by using physiological activity, activity, bone differentiation, bone differentiation and bone differentiation. Now, in order to make the leading factor of bone differentiation in the system of constant active bone differentiation, there is no significant difference between the two groups in the process of bone differentiation. Now, in the process of bone differentiation, there is a significant difference between the two groups. The origin of the peripheral blood, the nuclear globule drawing, the writing factor, the NFkB, the writing factor, the cell division, the cell differentiation, the proliferation, the bone differentiation, the bone differentiation.