新規軟骨分化誘導因子ZSCANCの機能解析

SOX6およびII型コラーゲンの転写開始点近傍にZSCANCの応答領域が存在することが明らかとなり、その範囲を50bp以内に絞りこんだ。またII型コラーゲン以外にもアグリカンなどの軟骨基質分子、さらにX型コラーゲン、VEGFAなどの後期分化において重要な役割を果たす分子のプロモーターを活性化することも明らかになった。またSOX6およびII型コラーゲンのプロモーター活性化においてはC/EBP・やGATA5が、X型コラーゲンについてはZIC3が、それぞれZSCANと協調的に作用することも明らかとなり、様々な転写因子と協調することによって多彩な標的分子を転写誘導する可能性が示唆された。既にII型コラーゲン誘導能が明らかになっている共役転写因子C/EBP・やGATA5について、脱分化軟骨細胞にレトロウィルスによる遺伝子導入後アルシアンブルーおよびALP染色にて検討をしたところ、ZSCANCはC/EBP・やGATA5による軟骨細胞の細分化誘導能を増強することが明らかになった。未分化軟骨細胞ATDC5に同様の遺伝子導入を行って検討したところ、軟骨基質誘導能のみならず、肥大分化促進能も有することが明らかとなった。レトロウィルスベクターを用いてZSCANCのsiRNAをATDC5に安定導入し、インスリン刺激で軟骨分化誘導させた後にアルシアンブルーおよびALP染色にて検討をしたところ、基質産生、肥大分化がともに抑制されることも明らかとなった。以上よりZSCANCは様々なパートナー分子と協調的に働いて軟骨分化の各段階を制御することが予測される。ZSCANCのin vivoの機能を検証するため、遺伝子ターゲティングベクターを用いてノックアウトマウスを作成し、解析を行っている。

SOX6およびII型コラーゲンの転写開始点近傍にZSCANCの応答領域が存在することが明らかとなり、その範囲を50bp以内に絞りこんだ。またII型コラーゲン以外にもアグリカンなどの軟骨基質分子、さらにX型コラーゲン、VEGFAなどの後期分化において重要な役割を果たす分子のプロモーターを活性化することも明らかになった。またSOX6およびII型コラーゲンのプロモーター活性化においてはC/EBP・やGATA5が、X型コラーゲンについてはZIC3が、それぞれZSCANと協調的に作用することも明らかとなり、様々な転写因子と協調することによって多彩な標的分子を転写誘導する可能性が示唆された。既にII型コラーゲン誘導能が明らかになっている共役転写因子C/EBP・やGATA5について、脱分化軟骨細胞にレトロウィルスによる遺伝子導入後アルシアンブルーおよびALP染色にて検討をしたところ、ZSCANCはC/EBP・やGATA5による軟骨細胞の細分化誘導能を増強することが明らかになった。未分化軟骨細胞ATDC5に同様の遺伝子導入を行って検討したところ、軟骨基質誘導能のみならず、肥大分化促進能も有することが明らかとなった。レトロウィルスベクターを用いてZSCANCのsiRNAをATDC5に安定導入し、インスリン刺激で軟骨分化誘導させた後にアルシアンブルーおよびALP染色にて検討をしたところ、基質産生、肥大分化がともに抑制されることも明らかとなった。以上よりZSCANCは様々なパートナー分子と協調的に働いて軟骨分化の各段階を制御することが予測される。ZSCANCのin vivoの機能を検証するため、遺伝子ターゲティングベクターを用いてノックアウトマウスを作成し、解析を行っている。