神経シグナル伝達を介する中枢神経微小循環の電気薬理的解明と麻酔薬作用に関する研究

神经信号传递介导的中枢神经微循环的电药理学阐明及麻醉药物作用研究

基本信息

批准号：
16659426
负责人：
木下浩之
金额：
$ 2.18万
依托单位：
Wakayama Medical University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2004
资助国家：
日本
起止时间：
2004 至 2005
项目状态：
已结题

项目摘要

ハロタンで麻酔したラットより脳を摘出し,ビブラトームを用いて,酸素93%+炭酸ガス7%で通気し,4℃に冷却したクレブス液内で脳スライス標本(厚さ約150μm)を作成した.ついで,この標本を,酸素93%+炭酸ガス7%(この混合気の通気でクレブス液のpHは7.4となる)で通気し,37℃に加温したクレブス液で満たした観察用チャンバーに入れ,顕微鏡で脳実質内動脈(径約20μm)を観察した.動脈の画像を現有のCCDカメラで撮影し,メディアコンバータを介してコンピュータに取り込んだ動脈径の変化をコンピュータ上で血管径測定用のソフトウエアを用いて解析した.FHS社製のconcentric bipolar電極(先端径25μm)を用い,0.2Hz,1000pAで脳スライス標本を電気刺激したが,血管は反応しなかった.そこで,同じ電極を用い,刺激強度を400μA,30秒のテタヌス刺激に変更した.この刺激により,脳微小血管は,一過性に収縮した後,拡張反応を示した.この一過性の収縮反応は,ナトリウムチャネル阻害薬であるテトロドトキシン(1μM)の前処置で完全に抑制されたことから,脳内の神経伝達を介する収縮反応であることが明らかとなった.今後,収縮後の拡張反応が,各種K^+チャネル拮抗薬(イベリオトキシン[large-conductanceカルシウム依存性,0.1μM],カリブドトキシン[intermediate-conductanceカルシウム依存性,0.1μM],アパミン[small-conductanceカルシウム依存性,0.1μM],グリベンクラミド[ATP感受性,5μM],4-アミノピリディン[電位依存性,1mM],BaCl_2[内向き整流性,10μM])により修飾されるか否かを検討する予定である.

从用硫烷麻醉的大鼠中去除大脑，并使用振动型在克雷布斯溶液中制备脑切片样品（约150μm厚）。然后将样品用93％的氧 + 7％二氧化碳（Krebs溶液的pH值为7.4）充气，并将其放置在装满Krebs溶液的观测室中，使用显微镜将其温暖至37°C的晶体内动脉（大约20μmMiate）。用当前的CCD摄像头拍摄动脉的图像，并使用软件在计算机上分析了通过媒体转换器将动脉直径的变化分析到计算机上，以测量计算机上的血管直径。同心，由FHS制成。使用双极电极（尖端直径为25μm），在1000 pA时以0.2 Hz的刺激脑切片样品，但血管没有响应。因此，将刺激强度更改为400μA，持续30秒的破伤风刺激。这种刺激导致脑微血管瞬间收缩，然后灭绝。通过用四毒素（1μM）（钠通道抑制剂）预处理，完全抑制了这种瞬时收缩，并且发现它是通过大脑中神经传递介导的收缩反应。将来，进行收缩后的扩张。我们将研究该反应是否通过各种K^+通道拮抗剂（Iberiotiantance钙依赖性钙依赖性，0.1μM），caribdototoxin [中间导电性钙依赖性，0.1μM]，apamin，小电导钙[依赖性钙依赖于0.1μm]，glibenciniendiensirilighlameirsiridsimilighirimiendiend，是否可以修饰反应。 [电压依赖性，1毫米]，BACL_2 [向内整流，10μm]）。