ヒト末梢血幹細胞による血管再生に及ぼす酸化ストレスの影響と麻酔薬作用に関する研究

氧化应激和麻醉作用对人外周血干细胞血管再生影响的研究

基本信息

批准号：
18659462
负责人：
木下浩之
金额：
$ 1.98万
依托单位：
Wakayama Medical University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2006
资助国家：
日本
起止时间：
2006 至 2008
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-18659462/
关键词：
末梢血幹細胞 CD34 スーパーオキシド

项目摘要

健常ボランティアの末梢静脈血より末梢血幹細胞を分離した。分離に際しては、問診及び血液検査でボランティアが健常であることを確認してから行った。細胞分離には、当該施設に現有のガンブロ社製血液成分分離装置(COBE Spectra WBC採取システム)を用いた。採取した血管内皮前駆細胞を採取可能なように、CD34陽性細胞である細胞のみを得られるように本装置でのアフェレーシスを設定した。まず、末梢血中単球全体の0.01%を占める血管内皮前駆細胞(EPCs)を採取した。その後、ヒトフィブロネクチン、5%ウシ血清と成長因子を加えた血管内皮細胞用の培養液(EBM-2)を用いて採取した細胞を現有の炭酸ガスインキュベータで培養した。これらにより、継代を8回行った培養EPCsの細胞浮遊液を作製し実験に使用した。培養EPCsの細胞浮遊液に対し、細胞内スーパーオキシド発生薬LY83583(5×10^-7 mol/L)を作用させ72時間培養した。昨年度のLY83583(10^-6 mol/L)検討結果と同様に、大多数が死滅するか、または大多数が生存するという非常に効果が不安定な結果がえられた。そこで、現在、LY83583に代わるスーパーオキシド発生系およびちょうど50%の細胞が死滅する程度のスーパーオキシド自体の投与を考案中である。次いで、対照、LY83583を加えた培養液に、静脈麻酔薬としてプロポフォール(10^-6 mo1/L)、吸入麻酔薬としてセボフルラン(1.0MAC)を加えその酸化ストレスに対する保護作用を検証する予定である。

从健康志愿者的外周静脉血中分离出外周血干细胞。分开时，通过医学访谈和血液检查确认志愿者是健康的。对于细胞分离，使用了该设施目前可用的血液成分分离装置（Cobe Spectra wbc收集系统）。使用该设备建立了格子化，因此只能获得CD34阳性细胞的细胞，以便收集血管内皮祖细胞。首先，收集了血管内皮祖细胞（EPC），占周围血液中所有单核细胞的0.01％。之后，使用含有人纤连蛋白，5％牛血清和生长因子的血管内皮细胞（EBM-2）的培养基收集细胞，并在当前的二氧化碳孵化器中培养。通过这样做，准备了八次培养的EPC的细胞悬浮液，并在实验中使用。用细胞内超氧化物开发人员LY83583（5×10^-7 mol/L）处理培养的EPC的细胞悬浮液，并培养72小时。与去年LY83583（10^-6 mol/L）研究的结果相似，结果极为不稳定，大多数被杀或大多数幸存下来。因此，我们目前正在设计LY83583超氧化物开发系统的替代方案，并在恰好50％的细胞死亡的程度上施用了超氧化物本身。接下来，将将丙泊酚（10^-6 mo1/l）作为静脉麻醉和七氟醚（1.0 MAC）作为吸入麻醉剂（1.0 MAC），将添加到包含对照LY83583的培养基中，以验证其针对氧化应激的保护作用。