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ヒト末梢血幹細胞による血管再生に及ぼす酸化ストレスの影響と麻酔薬作用に関する研究

氧化应激和麻醉作用对人外周血干细胞血管再生影响的研究

基本信息

批准号：
18659462
负责人：
木下浩之
金额：
$ 1.98万
依托单位：
Wakayama Medical University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2006
资助国家：
日本
起止时间：
2006 至 2008
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-18659462/
关键词：
末梢血幹細胞 CD34 スーパーオキシド

项目摘要

健常ボランティアの末梢静脈血より末梢血幹細胞を分離した。分離に際しては、問診及び血液検査でボランティアが健常であることを確認してから行った。細胞分離には、当該施設に現有のガンブロ社製血液成分分離装置(COBE Spectra WBC採取システム)を用いた。採取した血管内皮前駆細胞を採取可能なように、CD34陽性細胞である細胞のみを得られるように本装置でのアフェレーシスを設定した。まず、末梢血中単球全体の0.01%を占める血管内皮前駆細胞(EPCs)を採取した。その後、ヒトフィブロネクチン、5%ウシ血清と成長因子を加えた血管内皮細胞用の培養液(EBM-2)を用いて採取した細胞を現有の炭酸ガスインキュベータで培養した。これらにより、継代を8回行った培養EPCsの細胞浮遊液を作製し実験に使用した。培養EPCsの細胞浮遊液に対し、細胞内スーパーオキシド発生薬LY83583(5×10^-7 mol/L)を作用させ72時間培養した。昨年度のLY83583(10^-6 mol/L)検討結果と同様に、大多数が死滅するか、または大多数が生存するという非常に効果が不安定な結果がえられた。そこで、現在、LY83583に代わるスーパーオキシド発生系およびちょうど50%の細胞が死滅する程度のスーパーオキシド自体の投与を考案中である。次いで、対照、LY83583を加えた培養液に、静脈麻酔薬としてプロポフォール(10^-6 mo1/L)、吸入麻酔薬としてセボフルラン(1.0MAC)を加えその酸化ストレスに対する保護作用を検証する予定である。

Isolation of peripheral venous blood stem cells from Kensei Medical Biotechnology. Isolation of the disease, consultation and blood test, the patient's health is often confirmed by the patient. For cell separation, the existing blood component separation device (COBE Spectra WBC Separation System) manufactured by the facility is used. It is possible to collect pre-vascular endothelial cells and CD34-positive cells. Therefore, 0.01% of the total number of cells in peripheral blood is collected from endothelial pro-endothelial cells (EPCs).その后, ヒトフィブロネクチン, 5% ウシ serum and growth factor を plus えた vascular endothelial cells culture The nutrient solution (EBM-2) is used to collect the cells and culture them using the existing carbonic acid sterilizer. The cell suspension used for culturing EPCs was produced and used by the company. EPCs were cultured using cell suspension liquid and intracellular lysate LY83583 (5×10^-7 mol/L) for 72 hours. Yesterday's LY83583 (10^-6 mol/L) test result was the same, the majority was dead, and the majority was alive. The effect was very unstable and the result was unstable.そこで、Now、LY83583に代わるスーパーオキシド発生式およびちょうThe degree of death of 50% of the cells is determined by the autologous injection test. Sub-いで, 対光, LY83583をadded-えたculture mediumに, intravenous anesthesia 酔薬としてプロポフォール(10^-6 mo1/L), inhalation anesthesia としてセボフルラン(1.0MAC)をadded acidification ストレスに対するprotective effect を検证するpredetermined である.