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ヒト側頭骨病理標本からレーザーキャプチャー・ダイセクションによる難聴遺伝子の抽出

激光捕获解剖从人颞骨病理标本中提取听力损失基因

基本信息

批准号：
16659462
负责人：
喜多村健
金额：
$ 2.11万
依托单位：
Tokyo Medical and Dental University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2004
资助国家：
日本
起止时间：
2004 至 2006
项目状态：
已结题

项目摘要

難聴の病態を解析するために、難聴発症の原因が明瞭である難聴遺伝子変異の定量解析と内耳組織病理の相関を検討した。本年度に対象とした症例は、非症候群性遺伝性難聴であるミトコンドリアDNA7511変異である。対象症例のセロイジン包埋側頭骨標本の切片上でレーザーを用いて、蝸牛有毛細胞、血管条、ラセン神経節細胞を数個ずつ採取した。採取した細胞からpure gene kitにてDNAを抽出しTaqMan PCRにて定量的PCRを施行した。当該遺伝子変異は、TaqMan PCRにて増幅可能なプライナー設計が不能と判明した。ミトコンドリアDNA3243変異であるMELAS症例の側頭骨病理においては、遺伝子変異の定量解析と病理変化の相関を既に報告している(Laryngoscope,2003)。本年度は、同じミトコンドリアDNA3243変異であるMELAS症例の側頭骨病理を新たに採取・DNAを抽出し、定量的PCRを施行して、遺伝子変異量と病理変化の相関を解析中である。ヒト側頭骨を、病理解剖時に採取・凍結保存し、RNA later溶液中にて骨迷路を削り、蝸牛・前庭の膜迷路を採取して、RNAを抽出した。TaqMan probeを用いたりアルタイムPCR法により、COCH、SLC26A4、CDH23、ATP2B2のmRNAの定量を行った。ヒト側頭骨を前期高齢者(65歳以上75歳未満)と超高齢者(90歳以上)の2群に分類して、両者間のmRNAの差を解析中である。

Difficult 聴の pathological を parsing するために, difficult 聴発 disease のが distinct である difficult 聴 heritage 伝 sub - different quantitative analytic と inner ear histopathologic のの masato を beg し検た. This year, に targeted とたた cases である, non-syndromic sexual dyspepsis 伝 sexual difficulties 聴である, トコドリアドリアDNA7511 changes である. Cases like a seaborne のセロイジン embedding on the lateral skull specimens の slice でレーザーを with いて, snails are hair cells, blood vessels, ラセン god 経 ganglion cells を several ずつ take した. The DNAを of <s:1> た cells, らpure gene kitにて, を was extracted, and the PCRを quantified by <s:1> TaqMan PCRにて was performed on た. When the 伝 sub-variation of this offspring is different, the increase in TaqMan PCRにて may be なプラなプラナ <s:1> design が cannot と determine the た. ミトコンドリア DNA3243 - different である MELAS syndrome cases の lateral skull pathological においては, heritage 伝 sub - different quantitative analytic と pathological variations change のの masato をに report both している (Laryngoscope, 2003). は this year, with じミトコンドリア DNA3243 - different である MELAS syndrome cases の lateral skull pathological を new たに take DNA を drew し, quantitative PCR を imposed してと pathological variations, but 伝 - different quantity change の phase masato を parsing である. ヒト lateral skull を, pathological anatomy に take freezing preservation し, RNA later in the solution にて bony labyrinth を cut り, snails, vestibular の membranous labyrinth を take して, RNA を spare した. The TaqMan probeを quantified を lines った using the をたアアタタムムPCR method によ, COCH, SLC26A4, CDH23, and ATP2B2 <s:1> mRNA <e:1>. ヒト early high lateral skull を齢 (65 more than 75 showed not against) showed と ultra-high 齢 person (90 +) showed の 2 group of に classification して, struck between の mRNA の poor を parsing である.