ヒト歯根膜細胞による破骨細胞抑制因子(OPG)の発現量を増大させる物質は何か?

什么物质可以增加人牙周膜细胞破骨细胞抑制因子（OPG）的表达？

• 批准号: 16659524
• 负责人: 前田 英史
• 金额: $ 2.11万
• 依托单位: Kyushu University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2004
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2004 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-16659524/
• 关键词: ヒト歯根膜細胞; LPS; OPG; RANKL; ルシフェラーゼアッセイ

(1)レポーターベクターの作製ヒト骨芽細胞株SaOs2のDNAを抽出し、過去に活性が高いことで報告されているOPGのプロモーター領域(2kbp)(Thirunavukkarasu et al. J Biol Chem 276:39,36241,2001)をPCRにて増幅し、その後Renillaルシフェラーゼベクターとライゲーションを行いOPGのレポーターベクターの作製に成功した。またRANKLについては、Reddy博士(サウスカロライナ医科大学)よりFirenyルシフェラーゼベクターにプロモーター領域(2kbp)をライゲーションしたベクターの供与を受けた。(2)歯根膜細胞への遺伝子導入抜去した歯牙より得られた歯根膜から培養皿上へ遊離してきた細胞に、OPGまたはRANKLのレポーターベクターをコントロールベクターと共に同時に遺伝子導入する。その際、プライマリーの細胞の核に高い導入効率を有し、さらに導入の際に生じる死細胞の数が圧倒的に少ないという実績を持つ遺伝子導入装置(AMAXA)を用いた。(3)レポーターアッセイ遺伝子導入したヒト歯根膜細胞にLypopolysaccharide(LPS)を添加し、OPGおよびRANKLの発現について今回購入したルミノメーターを用いてアッセイを行ったところ、OPG, RANKLともに発現が誘導されるが、OPGの方がより多く合成されていることが明らかになった。今後さらに、これらのプロモーターに結合する転写因子について解析し、歯根膜細胞に働くLPSの情報伝達機構について解明することで、細菌感染による炎症の拡大を防ぐことができる新薬の開発につなげていこうと考えている。またこのような作用を持つ物質を歯科材料に配合することで、逆根管充填剤への応用についても検討している。(今回の研究は九州大学歯学研究院の生命倫理委員会にて認可されている)

(1)DNA extraction from bone bud cell line SaOs2 was reported to have high activity in the past (2kbp)(Thirunavukkarasu et al. J Biol Chem 276:39, 36241, 2001). PCR amplification was successful in the production of OPG. RANKL (2)The expression of DNA in the root membrane cells was detected in vitro and the expression of DNA in the root membrane cells was detected simultaneously. In addition, the number of dead cells in the nucleus during introduction is reduced due to the high introduction efficiency of the nucleus during introduction and the low number of dead cells during introduction. In addition, the use of the AMAXA is also discussed. (3)The introduction of lipopolysaccharide (LPS) into the root membrane cells, OPG and RANKL were added to the root membrane cells, and OPG and RANKL were synthesized. In the future, there will be new developments in the field of inflammation prevention caused by pathogenic bacteria, such as the analysis of factors associated with the combination of LPS and information transmission mechanisms in root membrane cells. The effect of root canal filling on dental materials is discussed. (This study was approved by the Bioethics Committee of Kyushu University Graduate School of Dentistry)

项目成果

Fibroblastic cells from human periapical granulation tissue preferentially form calcified matrices in decalcified and boiled rat bone.

来自人根尖肉芽组织的成纤维细胞优先在脱钙和煮沸的大鼠骨中形成钙化基质。

• 发表时间: 2005
• 期刊: Cell and Tissue Research (in press)
• 作者: Uinuk-Ool TS;Nikolas N;Sato A;Mayer WE;Klein J;佐藤哲二;Maeda et al.
• 通讯作者: Maeda et al.

Lipopolysaccharide stimulates osteoprotegerin and receptor activator of NF-kappa B ligand in periodontal ligament fibroblasts through the induction of IL-1 beta and TNF-alpha.

脂多糖通过诱导 IL-1 β 和 TNF-α 刺激牙周膜成纤维细胞中的骨保护素和 NF-κ B 配体受体激活剂。

• 发表时间: 2004
• 期刊: Bone 35(3)
• 作者: Wada et al.