電子顕微鏡観察用プローブを用いた生理活性物質受容体の細胞内局在性に関する研究

利用电镜探针研究生理活性物质受体的细胞内定位

• 批准号: 17651116
• 负责人: 上田 実
• 金额: $ 1.6万
• 依托单位: Tohoku University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2005
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2005 至 2006
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-17651116/
• 关键词: 就眠運動; 電子顕微鏡; 免役電顕法; 光親和性標識化; 覚醒物質; イソレスペデジン酸カリウム; EMプローブ; 原形質膜; 受容体

就眠運動の制御に関与する活性物質受容体については、覚醒物質イソレスペデジン酸カリウムを用いた系での研究が進んでいる。イソレスペデジン酸カリウムを母核とした光親和性プローブを用いて、運動細胞膜画分から、受容体候補として非常に有力な分子量約210kDa、180kDaの2種の巨大な膜タンパク質が発見された。しかし、受容体タンパク質の細胞内局在性については未知であった。本研究では、イソレスペデジン酸カリウムを母核とした骨格に、光親和性基ベンゾフェノン、抗原としてFITCを導入したTEMプローブを合成した。このプローブは、標的細胞上の受容体タンパク質に対して、光化学反応により共有結合的にクロスリンク形成し、これを抗原標識化することができる。対応する抗FITC抗体し、ナノゴールド粒子を結合させることで、電子顕微鏡を用いた免疫電顕法による受容体の直接観察を行った。その結果、受容体分子が運動細胞表面の原形質膜上に存在することを示す結果が得られた。イソレスペデジン酸カリウムは、細胞外から細胞膜上の受容体に作用することでその膨圧変化を引き起こし、葉の運動を引き起こすことが明らかになった。本研究により、ミクロな活性物質をツールとすることで、マクロな生物個体の生理現象が起こる仕組みを、タンパク質、細胞、組織レベルで解明することができた。

Sleep movement の suppression に masato and す る active substances by let body に つ い て は 覚 awoke and material イ ソ レ ス ペ デ ジ ン acid カ リ ウ ム を with い た department で が の research into ん で い る. イ ソ レ ス ペ デ ジ ン acid カ リ ウ ム を mother nucleus と し た light affinity プ ロ ー ブ を with い て, sports membrane か ら, let body alternate と し て very powerful な に molecular weight about 210 kda, 180 kda の two huge の な membrane タ ン パ ク qualitative が 発 see さ れ た. The intracellular localization of the <s:1> タ パ パ パ in the <s:1> tissue is に て て パ unknown であった. This study で は, イ ソ レ ス ペ デ ジ ン acid カ リ ウ ム を mother nucleus と し た bone に, light affinity ベ ン ゾ フ ェ ノ ン, antigen と し て FITC を import し た TEM プ ロ ー ブ を synthetic し た. こ の プ ロ ー ブ は, target cells の is let body タ ン パ ク qualitative に し seaborne て, photochemical 応 に よ り mutual combination of に ク ロ ス リ ン ク し, こ れ を antigen identification is changed す る こ と が で き る. 応 seaborne す る FITC antibody し resistance, ナ ノ ゴ ー ル ド particle を combining さ せ る こ と で, electronic 顕 micromirror を with い た immune 顕 method に よ る by line let body の 観 directly examine を っ た. The そ results, the recipient molecules が move, the <s:1> protoform on the cell surface に exists on the plasma membrane する す とを shows that the す results が obtain られた. イ ソ レ ス ペ デ ジ ン acid カ リ ウ ム は, extracellular か ら membrane の subjected to let body に す る こ と で そ の bentonite 圧 variations change を lead き up こ し, leaf を の movement led き こ す こ と が Ming ら か に な っ た. This study に よ り, ミ ク ロ な active substances を ツ ー ル と す る こ と で, マ ク ロ な physiological phenomenon が up individual の こ る blackstone group み を, タ ン パ ク qualitative, cell, tissue レ ベ ル で interpret す る こ と が で き た.

项目成果

Double Fluorescence-labeling Study on Genus Albizzia Using a Set of Fluorecence-labeled Leaf-movement Factors to Identify the Spatial Distribution of their Receptors

使用一组荧光标记的叶运动因子对合欢属进行双荧光标记研究，以识别其受体的空间分布

• 发表时间: 2006
• 期刊: Chemistry Letters 35
• 作者: Y.Nakamura;A.Matsubara;M.Okada;T.Kumagai;M.Ueda
• 通讯作者: M.Ueda

ハエトリソウの「記憶」物質を追って

追寻捕蝇草的“记忆”物质

• 发表时间: 2005
• 期刊: 現代化学(5月号)
• 作者: 上田;他
• 通讯作者: 他

Nanometer-scale Direct Observation of the Receptor for Leaf-movement Factor in the Plant Cell by Using Novel TEM Probe

使用新型 TEM 探针纳米尺度直接观察植物细胞中叶运动因子的受体

• 发表时间: 2007
• 期刊: Tetrahedron Letters 48
• 作者: Y. Manabe;T. Sugimoto;T. Kawasaki;and M. Ueda
• 通讯作者: and M. Ueda

Affinity Purification of the Key Enzyme of Nyctinasty Controlling the Leaf-movement by Using Gluconoamidine Ligand

利用葡萄糖酸脒配体亲和纯化控制叶运动的Nyctinasty关键酶

• 发表时间: 2007
• 期刊: Tetrahedron Letters 48
• 作者: E. Kato;T. Sasaki;T. Kumagai and M. Ueda
• 通讯作者: T. Kumagai and M. Ueda

Concise Syntheses of Glyconoamidines as Affinity Ligands for the Purification of β-Glucosidase Involved in a Control of Some Biological Events Including Plant Leaf-Movement,

作为亲和配体的糖苷脒的简明合成，用于纯化参与控制一些生物事件（包括植物叶片运动）的 β-葡萄糖苷酶，

• 发表时间: 2005
• 期刊: Tetrahedron Lett. 46
• 作者: E.Kato;et al.
• 通讯作者: et al.