電子顕微鏡観察用プローブを用いた生理活性物質受容体の細胞内局在性に関する研究

利用电镜探针研究生理活性物质受体的细胞内定位

• 批准号: 17651116
• 负责人: 上田 実
• 金额: $ 1.6万
• 依托单位: Tohoku University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2005
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2005 至 2006
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-17651116/
• 关键词: 就眠運動; 電子顕微鏡; 免役電顕法; 光親和性標識化; 覚醒物質; イソレスペデジン酸カリウム; EMプローブ; 原形質膜; 受容体

就眠運動の制御に関与する活性物質受容体については、覚醒物質イソレスペデジン酸カリウムを用いた系での研究が進んでいる。イソレスペデジン酸カリウムを母核とした光親和性プローブを用いて、運動細胞膜画分から、受容体候補として非常に有力な分子量約210kDa、180kDaの2種の巨大な膜タンパク質が発見された。しかし、受容体タンパク質の細胞内局在性については未知であった。本研究では、イソレスペデジン酸カリウムを母核とした骨格に、光親和性基ベンゾフェノン、抗原としてFITCを導入したTEMプローブを合成した。このプローブは、標的細胞上の受容体タンパク質に対して、光化学反応により共有結合的にクロスリンク形成し、これを抗原標識化することができる。対応する抗FITC抗体し、ナノゴールド粒子を結合させることで、電子顕微鏡を用いた免疫電顕法による受容体の直接観察を行った。その結果、受容体分子が運動細胞表面の原形質膜上に存在することを示す結果が得られた。イソレスペデジン酸カリウムは、細胞外から細胞膜上の受容体に作用することでその膨圧変化を引き起こし、葉の運動を引き起こすことが明らかになった。本研究により、ミクロな活性物質をツールとすることで、マクロな生物個体の生理現象が起こる仕組みを、タンパク質、細胞、組織レベルで解明することができた。

The control of sleep movement is related to the study of active substance receptors and wake-up substances, including acidic acid and alkali.イソレスペデジン acid カリウムをMother nucleus としたPhotoaffinity プローブを use いて, motor cell membrane delineation から, receptor characterization There are two kinds of extremely potent and powerful supplements, the molecular weight of which is approximately 210kDa and 180kDa.しかし、The locality of the receptor in the cell is unknown. In this study, the イソレスペデジン acid カリウムを mother core and the photoaffinity baseベンゾフェノン, antigen としてFITCを introduction and TEMプローブを synthesis した.このプローブは, receptor タンパク性に対して on the target cell, photochemical reactionにクロスリンク is formed by combining にクロスリンク, and これをantigen is labeled することができる. The anti-FITC antibody is used, the nanoparticles are combined, and the electron microscopy is used to detect the direct observation of the receptor using the immune electrolyte method. As a result, the acceptor molecule moves and exists on the original plasma membrane on the surface of the cell, indicating that the result is obtained.イソレスペデジン acid カリウムは, extracellular からAcceptor function on the cell membrane することでそのswelling pressure change をinduced こし, leaf のmovement をinduced きrise こすことが明らかになった. This study studies the physiology of individual organisms such as により and ミクロな active substances をツールとすることで and マクロな biological individuals. Phenomenon が出こる士组みを、タンパクPlasma, cell, tissue レベルで Explain することができた.

项目成果

Double Fluorescence-labeling Study on Genus Albizzia Using a Set of Fluorecence-labeled Leaf-movement Factors to Identify the Spatial Distribution of their Receptors

使用一组荧光标记的叶运动因子对合欢属进行双荧光标记研究，以识别其受体的空间分布

• 发表时间: 2006
• 期刊: Chemistry Letters 35
• 作者: Y.Nakamura;A.Matsubara;M.Okada;T.Kumagai;M.Ueda
• 通讯作者: M.Ueda

ハエトリソウの「記憶」物質を追って

追寻捕蝇草的“记忆”物质

• 发表时间: 2005
• 期刊: 現代化学(5月号)
• 作者: 上田;他
• 通讯作者: 他

Nanometer-scale Direct Observation of the Receptor for Leaf-movement Factor in the Plant Cell by Using Novel TEM Probe

使用新型 TEM 探针纳米尺度直接观察植物细胞中叶运动因子的受体

• 发表时间: 2007
• 期刊: Tetrahedron Letters 48
• 作者: Y. Manabe;T. Sugimoto;T. Kawasaki;and M. Ueda
• 通讯作者: and M. Ueda

Affinity Purification of the Key Enzyme of Nyctinasty Controlling the Leaf-movement by Using Gluconoamidine Ligand

利用葡萄糖酸脒配体亲和纯化控制叶运动的Nyctinasty关键酶

• 发表时间: 2007
• 期刊: Tetrahedron Letters 48
• 作者: E. Kato;T. Sasaki;T. Kumagai and M. Ueda
• 通讯作者: T. Kumagai and M. Ueda

Concise Syntheses of Glyconoamidines as Affinity Ligands for the Purification of β-Glucosidase Involved in a Control of Some Biological Events Including Plant Leaf-Movement,

作为亲和配体的糖苷脒的简明合成，用于纯化参与控制一些生物事件（包括植物叶片运动）的 β-葡萄糖苷酶，

• 发表时间: 2005
• 期刊: Tetrahedron Lett. 46
• 作者: E.Kato;et al.
• 通讯作者: et al.