新規SLC10ファミリートランスポーターの輸送機能および発現調節機構の解析

新型SLC10家族转运蛋白的转运功能及表达调控机制分析

• 批准号: 17659043
• 负责人: 鈴木 洋史
• 金额: $ 2.05万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2005
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2005 至 2006
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-17659043/
• 关键词: 胆汁酸; トランスポーター; 小腸; 肝臓; 血液脳関門

胆汁酸は生体内で極めて重要な役割を果たすが、血液脳関門における胆汁酸の細胞膜透過に関わるトランスポーターの同定は未だなされていない。また、小腸上皮細胞においても、消化管管腔から細胞内への輸送がASBT/SLC10A2によって行われていることが知られているものの、血管側膜を介した細胞内から血液中への輸送機構には不明の点が多い。申請者らは、NTCP/SLC10A1(血液から肝細胞内へのナトリウム依存的な胆汁酸取り込みに関与)・ASBT/SLC10A2のホモログとして、データベース上に3種類の機能未知のトランスポーター(SLC10A3,10A4,10A5)が存在することに着目した。本研究課題は、これらトランスポーターの輸送機能・細胞内局在・発現臓器などを解析し、生理的役割を見出すことを目的としている。昨年度までに得られたSLC10A3・10A4・10A5の全長cDNA配列をGFP融合蛋白発現ベクターに組み込んだ後、非極性細胞(HEK293細胞)・極性細胞(MDCK細胞)へ導入し、安定発現系を作製した。ウェスタンブロットにより蛋白の発現は確認されたものの、共焦点顕微鏡により細胞内局在を観察したところ、細胞膜上での発現は少なく、細胞内全体に分布したものが大部分であった。また、胆汁酸(タウロコール酸)・硫酸抱合体(エストロン-3-硫酸)・薬物(ジゴキシン)について検討したところ、これらの化合物はナトリウム存在下および非存在下において良好な基質とはならないことが示された。また、ラット小腸から調製した反転腸管を用いて胆汁酸の輸送実験を行った結果、血管側膜輸送におけるABCトランスポーターの寄与は小さいことが示され、Ostα/βなどが主として関与することが示唆された。

Bile acid は born in vivo で め extremely important な て "を cut fruit た す が, blood 脳 masato door に お け る bile acid の membrane through に masato わ る ト ラ ン ス ポ ー タ ー の with fixed は not だ な さ れ て い な い. ま た, intestinal epithelial cells に お い て も, digestive tube cavity か ら intracellular へ の conveying が ASBT/SLC10A2 に よ っ て line わ れ て い る こ と が know ら れ て い る も の の, blood vessels, lateral film を interface し た intracellular か ら blood へ の transportation agency に は unknown の が い more. Applicants ら は, NTCP/SLC10A1 (blood か ら liver cells へ の ナ ト リ ウ ム dependent な bile acid take り 込 み に masato and) ASBT/SLC10A2 の ホ モ ロ グ と し て, デ ー タ ベ ー ス に 3 kinds の function on the unknown の ト ラ ン ス ポ ー タ ー (SLC10A3, 10 a4, a5) 10 が exist す る Youdaoplaceholder3 とに looks at た. This research topic は, こ れ ら ト ラ ン ス ポ ー タ ー の conveying function, intracellular bureau in · 発 now viscera な ど を parsing し, physiological "を see cut out す こ と を purpose と し て い る. Yesterday annual ま で に have ら れ た SLC10A3, 10 a4, a5 の 10 full length cDNA match column を GFP fusion protein 発 now ベ ク タ ー に group み 込 ん, nonpolar cells after だ (HEK293 cells), bipolar cells (MDCK cells) へ import し, settle 発 now を cropping し た. ウ ェ ス タ ン ブ ロ ッ ト に よ り protein の 発 は now confirmed さ れ た も の の, total focus 顕 micromirror に よ り cells inside bureau in を 観 examine し た と こ ろ, membrane で の 発 は now less な く, all に distribution in the cell し た も の が most で あ っ た. ま た, bile acid (タ ウ ロ コ ー ル acid), hold fit sulfate (エ ス ト ロ ン - 3 - sulfuric acid), 薬 content (ジ ゴ キ シ ン) に つ い て beg し 検 た と こ ろ, こ れ ら の compound は ナ ト リ ウ ム presence お よ び the presence of に お い て good な matrix と は な ら な い こ と が shown さ れ た. ま た, ラ ッ ト small intestine か ら modulation し た inverse planning insufflate を with い て bile acid の delivery be 験 を line っ た results, blood vessels, lateral membrane transport に お け る ABC ト ラ ン ス ポ ー タ ー の send with は small さ い こ と が shown さ れ, Ost alpha/beta な ど が main と し て masato and す る こ と が in stopping さ れ た.

项目成果

Efflux mechanism of taurocholate across the rat intestinal basolateral membrane.

牛磺胆酸盐穿过大鼠肠基底外侧膜的流出机制。

• 发表时间: 2006
• 期刊: Mol Pharm. 3(3)
• 作者: Furukawa T;Kurokawa J.;Sakamoto S et al.
• 通讯作者: Sakamoto S et al.

Vectorial transport of unconjugated and conjugated bile salts by monolayers of LLC-PK1 cells doubly transfected with human NTCP and BSEP or with rat Ntcp and Bsep

• DOI: 10.1152/ajpgi.00364.2005
• 发表时间: 2006-03-01
• 期刊: AMERICAN JOURNAL OF PHYSIOLOGY-GASTROINTESTINAL AND LIVER PHYSIOLOGY
• 影响因子: 4.5
• 作者: Mita, S;Suzuki, H;Sugiyama, Y
• 通讯作者: Sugiyama, Y

Transport by vesicles of glycine- and taurine-conjugated bile salts and taurolothocholate 3-sulfate : a comparison of human BSEP with rat Bsep.

甘氨酸和牛磺酸结合胆盐和牛磺酰胆酸 3-硫酸盐的囊泡转运：人 BSEP 与大鼠 Bsep 的比较。

• 发表时间: 2005
• 期刊: Biochim Biophys Acta 1738(1-3)
• 作者: Hayashi H;Takada T;Suzuki H;Onuki R;Hofmann AF;Sugiyama Y
• 通讯作者: Sugiyama Y

LXR alpha transactivates mouse organic solute transporter alpha and beta via IR-1 elements shared with FXR

• DOI: 10.1007/s11095-006-9163-6
• 发表时间: 2007-02-01
• 期刊: PHARMACEUTICAL RESEARCH
• 影响因子: 3.7
• 作者: Okuwaki, Masae;Takada, Tappei;Suzuki, Hiroshi
• 通讯作者: Suzuki, Hiroshi

Inhibition of bile acid transport across Na+/taurocholate cotransporting polypeptide (SLC10A1) and bile salt export pump (ABCB 11)-coexpressing LLC-PK1 cells by cholestasis-inducing drugs

• DOI: 10.1124/dmd.105.008748
• 发表时间: 2006-09-01
• 期刊: DRUG METABOLISM AND DISPOSITION
• 影响因子: 3.9
• 作者: Mita, Sachiko;Suzuki, Hiroshi;Sugiyama, Yuichi
• 通讯作者: Sugiyama, Yuichi