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受容体介在性機構による遺伝子導入法の速度論的評価(組み換え型ウイルスベクターと非ウイルスベクターの細胞内動態の解析)

利用受体介导机制进行基因转移方法的动力学评估（重组病毒载体和非病毒载体的细胞内动力学分析）

基本信息

批准号：
09877423
负责人：
鈴木洋史
金额：
$ 1.28万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
1997
资助国家：
日本
起止时间：
1997 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

腫瘍組織特異的な遺伝子デリバリー法の開発は、腫瘍の遺伝子治療にとって重要な研究課題となる。腫瘍特異性を持たせる方法としては、腫瘍細胞に高発現されるサイトカイン受容体を用いる方法がある。現在まで、ecotropic retrovirus外殻蛋白にerythropoietinを組み込んだウイルスを用いることにより、またサイトカインとpoly lysine等を架橋したplasmid conjugateを用いること等によりターゲティングが試みられてきた。しかしながら、この様な組み換え型retrovirusの場合においても、感染効率の低下が問題となっている。本研究では、細胞内ソーティングに関する知見について検討を加え、より効率の高いベクターを開発する上での知見を得ることを目的としていた。ecotropic virus外殻蛋白gp70の種々制限酵素siteにヒトG-CSF遺伝子を組み込んだ。このplasmidをecotropic virus産生細胞(ψ_2BAGα)にtransfectし、上清を得た。この上清は表面にG-CSFを発現し、感染によりβ-galactosidaseをhost細胞に伝達しうるvirusを含む。種々のG-CSF受容体過剰発現細胞に対する感染効率について検討を加えたところ、Bam HIおよびBst EII site間にG-CSGを組み込んだvirusが他の組み換え型に比べて高い効率を示したものの、amphotropic virus(ψ-CRIP/BAGα)等に比べると極めて低い効率であるに過ぎなかった。また、非標識G-CSF大過剰により組み換え型ウイルスの感染が低下したことから、受容体介在性のendocytosisに依るものと考えられた。endocytosisで細胞内に侵入すると、acidsomeにおいて分解を受けるため、低い感染効率にとどまるものと考えられた。この分解を回避するためには、膜との融合等をも利用した方法を用いる必要があることが示唆された。

The development of tumor tissue-specific gene therapy is an important research topic. The method of tumor-specific expression of tumor cells was studied. Now, in the case of ecotropic retrovirus, erythropoietin can be used as a bridge between plasmid conjugate and polylysine. In the case of retrovirus, the infection rate is low. This study aims to improve the efficiency of intracellular communication and improve the understanding of communication. Ecotropic virus coat protein gp70 gene restriction enzyme site This plasmid is ecotropic virus producing cell (<$_2BAG α), and the supernatant is obtained. The supernatant contains G-CSF, β-galactosidase and virus. G-CSF receptor has a higher infection rate than other G-CSG receptor types, and amphotonic virus(CRIP/BAGα) has a lower infection rate than other G-CSF receptor types. G-CSF is a large, non-labeled substance, and its infection rate is low. Endocytosis is an intracellular disease, and some of the diseases are caused by cell invasion. The method of decomposition is necessary.