ES細胞由来マクロファージを用いた細胞磁界測定法の開発

使用ES细胞来源的巨噬细胞开发细胞磁场测量方法

• 批准号: 17659180
• 负责人: 相澤 好治
• 金额: $ 2.05万
• 依托单位: Kitasato University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2005
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2005 至 2007
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-17659180/
• 关键词: ES細胞; マクロファージ; 培養細胞; マウスES細胞; 肺胞マクロファージ; 細胞磁界測定; 細胞骨格

【目的】マウスのES細胞株であるCMTI-1(129SVマウス由来)を用いて、胚様体形成法を用いて、マクロファージへ分化誘導し、毒性学試験に使用できるかを検討した。【方法】前日にゼラチンコーディングされた60mmの培養皿にフィーダー細胞を1x10^6個まき、十分にピペティングを行いシングルセルにした上で、ES細胞を播いた(5x10^5個)。37℃、5%CO_2の条件下でleukemia inhibitory factor(LIF)を含んだDulbecco's modified Eagle medium(DMEM)で培養し、最初は毎日培地を交換して、3日ごとに継代した。5代継代の後、Lindmark, et. al.(2004)の研究を元に、マクロファージへの分化誘導を試みた。ES細胞をLIFを含んでいないIscove modified Dulbecco's media(IMDM)で3時間培養し、トリプシンで単離した後に、1x10^4個にして更に培養しEB細胞にし、11日後にInterleukin 3(IL-3)及びmacrophage colony stimulating factor(M-CSF),ヒトインスリン、IL-1βを含んだIscove modified Dulbecco's media(IMDM)で10日間培養し、マクロファージに分化させた。培養プレートに付着した細胞をマクロファージとして分離した。【結果】付着した細胞がごく一部で、フィーダー細胞との分離も難しく、毒性試験に供するほど、十分なマクロファージは得られなかった。【考察】既存のマクロファージ系培養細胞(J774.1細胞、RAW264.7細胞)では簡便に安価に毒性試験が実施でき、ES細胞からマクロファージを分化誘導する意義は現時点では大きくないと考える。

【 objective 】 マ ウ ス の ES cell lines で あ る CMTI - 1 (129 sv マ ウ ス origin) を with い て and others in embryo, fit the diagnosis を with い て, マ ク ロ フ ァ ー ジ へ induction し, toxicity test に use で き る か を beg し 検 た. 【 method 】 the day に ゼ ラ チ ン コ ー デ ィ ン グ さ れ た 60 mm の petri dish に フ ィ ー ダ ー 1 x10 cell を ^ 6 ま き, very に ピ ペ テ ィ ン グ を line い シ ン グ ル セ ル に し た を で, ES cells seeding on い た (5 x10 ^ 5). Under 37 ° C, 5% co ₂ <s:1> conditions, でleukemia inhibitory factor(LIF)を containing んだDulbecco's modified Eagle medium(DMEM)で culture <s:1>, initially <s:1> daily culture を exchange <s:1> て, 3 days ごとに継 generation た た. , after 5 継 generation の Lindmark, et. Al. (2004) の research を yuan に, マ ク ロ フ ァ ー ジ へ の induction を try み た. ES cells を LIF を containing ん で い な い Iscove modified Dulbecco 's media (IMDM) で 3 time cultivating し, ト リ プ シ ン で 単 from し た に, after 1 x10 ^ 4 に し て に cultivate more し EB cells に し, 11 に Interleukin 3(IL-3) and びmacrophage colony stimulating factor(M-CSF),ヒト <s:1> スリ スリ <e:1> <e:1>, IL-1βを containing んだIscove modified Dulbecco's media(IMDM)で 10-day culture で, ロファ ロファ ジに ジに differentiation させた. Culture プレ プレ トに トに carrying <s:1> た cells を を ロファ ロファ ジと て て て and separate た た. 【 results 】 pay the し た cells が ご く で, フ ィ ー ダ ー cells と の separation も difficult し く, toxicity test for す に る ほ ど, very な マ ク ロ フ ァ ー ジ は must ら れ な か っ た. [investigation] existing の マ ク ロ フ ァ ー ジ of cultured cells (J774.1 cells, RAW264.7 cells) で は simple に Ann 価 に toxicity test が be applied で き, ES cells か ら マ ク ロ フ ァ ー ジ を induction す る meaning は now point で は big き く な い と exam え る.

项目成果

Magnetometric evaluation of the effects of man-made mineral fibers on the function of macrophages using the macrophage cell line RAW 264.7.

• DOI: 10.2486/indhealth.45.426
• 发表时间: 2007-06
• 期刊: Industrial health
• 影响因子: 2
• 作者: K. Shibata;Yuichiro Kudo;M. Tsunoda;Mayuko Hosokawa;Y. Sakai;M. Kotani;Y. Aizawa

低濃度DBT曝露によるマクロファージ系細胞の生存率の低下、サイトカイン産生に対する影響.

由于低浓度 DBT 暴露，巨噬细胞谱系细胞的存活率降低并对细胞因子产生产生影响。

• 发表时间: 2007
• 作者: 角田 正史;吉田 珠恵;辻 雅善;張 瑩;菅谷 ちえ美;井上 葉子;三木 猛生;工藤 雄一朗;佐藤 敏彦;相澤 好治
• 通讯作者: 相澤 好治