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脊髄損傷に対するセンダイウイルスベクターを用いた遺伝子治療の検討

使用仙台病毒载体治疗脊髓损伤的基因治疗的考虑

基本信息

批准号：
17659460
负责人：
山崎正志
金额：
$ 2.18万
依托单位：
Chiba University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2005
资助国家：
日本
起止时间：
2005 至 2006
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-17659460/
关键词：
脊髄損傷遺伝子治療ウィルスベクターセンダイウィルス

项目摘要

研究目的:センダイウィルスベクターは、強力な感染性・タンパク発現効率の高さ・安全性を特徴とするウィルスベクターだが、血管閉塞性肢疾患での臨床治験も計画され審議中であることもあり、非常に注目を集めている。本研究の目的は、センダイウィルスベクターの正常および損傷脊髄に対する投与法を検討し、感染効率・導入遺伝子の発現様式や副作用の有無を明らかにすることである。方法:雄ウィスターラット8週齢の胸椎を全身麻酔下に椎弓切除した。マーカー遺伝子としてgreen fluorescent protein(GFP)を搭載したセンダイウィルスベクター(SeV)を、ガラスマイクロピペットを用いて3μl脊髄内に注入した。コントロールとして、同量の生理食塩水を同部位に注入した。注入後6時間・12時間・1日・3日・1週・2週・4週まで、麻痺の有無を中心に、ラットの行動を観察した。行動観察終了後、組織切片を作成し、組織の概形を検討、さらに抗GFP抗体を用いた免疫染色を行い、導入遣伝子の発現パターンを時間的・空間的に解析した。抗GFP抗体と神経系細胞の特異的マーカーを用いた免疫二重染色を行い、導入遺伝子の発現細胞を解析した。結果および考察:センダイウィルスベクター注入後ラットは一過性に軽度の後肢麻痺を呈したが、注入後3日程度で回復し、以後6週まで行動学的異常を認めなかった。組織学的にも、注入部のわずかな脱髄および神経細胞脱落を認めるのみで、組織障害はごく軽度と思われた。免疫染色の結果、注入部のみならず注入部頭尾側の神経線維にGFPの強い発現が見られた。発現は注入後5日がピークであり、注入後2週ではもはやGFP発現は認められなくなっていた。結論:センダイウィルスベクターは脊髄に強力に遣伝子導入することが可能であり、脊髄損傷に対する遺伝子治療のツールとして有用であると思われた。

Objective: To study the safety characteristics of clinical treatment plan for vascular diseases with high incidence of infection, high incidence of infection, and high incidence of acute leukemia. The purpose of this study is to investigate the effects of infection, the development of introduced pathogens, and the presence or absence of side effects on normal and injured spinal cord. Methods: The male was anesthetized and the thoracic arch was removed at 8 weeks. The green fluorescent protein (GFP) was injected into 3 μ l of the spinal cord. The same amount of physiological water is injected into the same site. 6 hours·12 hours·1 day·3 days·1 week·2 weeks·4 weeks after injection At the end of the study, tissue sections were prepared, tissue profiles were analyzed, anti-GFP antibodies were used, immunostaining was carried out, and the expression of proteins was analyzed in time and space. Anti-GFP antibodies were used to detect the expression of specific proteins in neurons by double immunostaining, and the expression of proteins in neurons was analyzed. Results: After injection, the degree of hind limb paralysis was transient, the degree of recovery was 3 days after injection, and the abnormality of kinematics was recognized 6 weeks later. Histological examination, injection, neurocytolysis, tissue damage, etc. Immunostaining results showed that GFP was strongly detected in the cerebral vascular lines at the caudal side of the injection site. 5 days after injection and 2 weeks after injection Conclusion: It is possible to introduce strong gene therapy into spinal cord injury, and it is useful to introduce gene therapy into spinal cord injury.

项目成果

期刊论文数量（12）

专著数量（0）

科研奖励数量（0）

会议论文数量（0）

专利数量（0）

Gene expression for type-specific collagens in osteogenic protein-1 (rhBMP-7)-induced lumbar intertransverse process fusion in rabbits

DOI：
10.1080/03008200600978292
发表时间：
2006-10-01
期刊：
CONNECTIVE TISSUE RESEARCH
影响因子：
2.9
作者：
Hisamitsu, Junshiro;Yamazaki, Masashi;Moriya, Hideshige
通讯作者：
Moriya, Hideshige

Association of increased type I collagen expression and relative stromal overgrowth in mouse epididymis neonatally exposed to diethylstilbestrol

DOI：
10.1002/mrd.20347
发表时间：
2005-11
期刊：
Molecular Reproduction and Development
影响因子：
2.5
作者：
K. Yamazaki;H. Fukata;T. Adachi;H. Tainaka;Masao Kohda;M. Yamazaki;K. Kojima;K. Chiba;C. Mori;M. Komiyama
通讯作者：
K. Yamazaki;H. Fukata;T. Adachi;H. Tainaka;Masao Kohda;M. Yamazaki;K. Kojima;K. Chiba;C. Mori;M. Komiyama

Hematopoietic stem cell and marrow stromal cell for spinal cord injury in mice