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ラット脊髄損傷モデルに対する骨髄間質細胞由来シュワン細胞移植の有用性の検討

骨髓基质细胞雪旺细胞移植对大鼠脊髓损伤模型有效性的检验

基本信息

批准号：
15659346
负责人：
山崎正志
金额：
$ 1.92万
依托单位：
Chiba University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2003
资助国家：
日本
起止时间：
2003 至 2004
项目状态：
已结题

项目摘要

[目的]骨髄間質細胞をin vitroでSchwann細胞に分化させた細胞(骨髄間質細胞由来Schwann細胞:Dezawa, Eur J Neurosci, 2001)をラット脊髄損傷モデルに移植し、その効果につき検討すること。[方法]1)成ラット大腿骨より骨髄を採取し付着性細胞を培養して、骨髄間質細胞を得た。2)1)の細胞をβ-メルカプトエタノール処理した後、all-transレチノイン酸を3日間加え、さらにフォルスコリン、bFGF,PDGF-AA,heregulinβ-1を加え1週間培養し、骨髄間質細胞由来Schwann細胞が得られた。3)ラット脊髄損傷モデルを作成した。8週齢雄Wistarラットを全身麻酔下に第7・第8胸椎椎弓切除し、その部分で脊髄を約4mm長の欠損ができるように切断して、脊髄完全損傷モデルとした。4)限外濾過膜を直径約2.2mm、5mm長の円筒形に成型したチューブに、骨髄間質細胞由来Schwann細胞をMatrigelに混和したものまたはMatrigelのみをそれぞれ充填し、脊髄欠損部に架橋状に移植した。5)移植後時間経過を追って、BBB locomotor scale (Basso et al. 1995)を用いて行動学的評価を行った。6)組織標本につき各種線維に対する抗体を用いた免疫染色にて移植したチューブ内への軸索の伸展を評価した。8)行動学的評価・組織学的評価につき両群間で比較し、骨髄間質細胞由来シュワン細胞の脊髄損傷モデルに対する有効性を検討した。[結果]骨髄間質細胞由来Schwann細胞を移植した群では移植後5週(損傷後6週)の時点で平均スコアが約7点と、コントロールの平均スコア3点と比較して有意な回復が観察された。免疫染色ではneurofilament陽性の神経線維が骨髄間質細胞由来Schwann細胞移植群でチューブ内に多く見られた。Tyrosine hydroxylase陽性の下降性線維が骨髄間質細胞由来Schwann細胞移植群でチューブ内に多く見られた。Serotonin陽性線維数calcitonin gene related peptide陽性線維数は両群間で有意差がなかった。また、骨髄間質細胞由来Schwann細胞移植群で機能回復が見られたもののうち2匹に対し、移植後5週時、移植チューブの再切断を行ったところ、回復した機能はすべて失われその後も回復しなかった。[考察]骨髄間質細胞由来Schwann細胞移植は軸索再生を促進し、後肢機能を有意に回復させた。骨髄間質細胞由来Schwann細胞は、採取の容易さ・自己移植可能であることなどから、脊髄損傷に対する細胞治療の細胞ソースの候補として有望である。

[objective] to differentiate in vitro Schwann cells from Schwann cells (Dezawa, Eur J Neurosci, 2001). [methods] 1) the thigh bone, the thigh bone and the thigh bone. 2) 1) after the treatment of cell culture, the temperature of all-trans was increased for 3 days, the temperature of bFGF,PDGF-AA,heregulin β-1 was increased, and the culture of bone marrow cells was improved. The origin of bone marrow cells was increased by Schwann. 3) make sure that the spine is finished. Under general anesthesia, the 7th and 8th thoracic vertebrae were resected under 8-year-old male Wistar anesthesia, and some of the spinal cord was resected. The spinal cord was completely cut off and the spinal cord was completely cut. 4) the diameter of the external membrane is about 2.2mm, the diameter of the 5mm tube is shaped, the bone tissue is formed, the bone tissue is derived from the Schwann cell, the Matrigel is mixed with the bone, the Matrigel is filled, and the spine is scaffolded and transplanted. 5) after transplantation, we went through the following procedures: BBB locomotor scale (Basso et al. 1995) use the kinesiology to do the same thing. 6) in this paper, all kinds of anti-tumor antibodies were used in tissue labeling, and immuno-staining was used to transplant antigens. 8) in the field of dynamics, the comparison between groups and the origin of bone cancer cells are related to the origin of bone marrow cells. [results] the origin of bone marrow cells was Schwann cell transplantation. The average temperature at 5 years after transplantation (6 years after transplantation) was about 7: 00, and the average temperature at 3: 00 was significantly higher than that at 5: 00 after transplantation. Immunocytochemical staining showed that the cells of neurofilament sex were derived from Schwann cells, and there were multiple diseases in the cell transplantation group. Tyrosine hydroxylase sexual decline is related to the origin of Schwann cells in the cell transplantation group. The number of Serotonin properties, the number of calcitonin gene related peptide sex lines, the number of data sets, the number of gender lines, the The origin of the Schwann cell transplantation group is that the cell transplantation group is able to return two cycles after transplantation. 5 hours after the transplantation, the grafts were cut off and then cut off after the transplantation, and then returned to the hospital after the failure. [investigation] the origin of Schwann cell transplantation, the promotion of cord regeneration, and the intention of the hindlimb to return to the bone marrow. The origin of bone cancer cell is Schwann cell, it is easy to get it, and it is possible to transplant it by yourself. It is possible that you can transplant it yourself.