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精巣形成過程における生殖細胞に特異的なマイクロRNAの同定と発現解析

睾丸形成过程中生殖细胞特异性microRNA的鉴定和表达分析

基本信息

批准号：
17659524
负责人：
瀧澤敬美
金额：
$ 2.11万
依托单位：
Nippon Medical School
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2005
资助国家：
日本
起止时间：
2005 至 2006
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-17659524/
关键词：
microRNA マウス生殖腺精巣卵巣クローニング性差

项目摘要

哺乳類において、個々の組織・臓器に特異的なmicroRNA(miRNA)の機能は不明である。その解明のためには、個々の組織・臓器において、miRNAの発現プロファイルを明らかにすることが急務である。今回の萌芽研究で、その方法開発と、その応用としてマウス生殖腺におけるmiRNA発現プロファイル解析を行った。今回我々は2度PCRを行いその産物を用いることによりクローンの効率的なconcatenationに成功し、大量のクロ,_ニング解析が可能となった。この解析により、1)成獣マウス精巣、卵巣から、それぞれ10,852個、11,744個のsmall RNAをクローニングし、その内、6,630個(116種類)、10,192個(120種類)の既存のmiRNAのクローニングに成功した。従来の報告と比較し、1〜2桁オーダーの異なる、組織・臓器レベルのmiRNAプロファイル解析が可能となった。2)約30個の精巣、卵巣に特異的、または他の臓器と比較し優位な発現をしているmiRNAを同定した。3)クローニングされたもののうち、既知miRNAに当てはまらず、バイオインフォマティクスを用いたマウスゲノム上の2次構造解析より、新規miRNAを18個同定した。4)卵巣特的に発現しているmiRNAsのうち、miR-351に関してin situ hybridizationを行い、顆粒膜細胞に特異的に発現していることを明らかにした。成果は投稿準備中である。今回の萌芽研究により、種々の組織・臓器に応用可能なmiRNA発現プロファイル解析法の開発に成功し、miRNA機能解析のための組織特異的なmiRNAの同定が可能となった。生殖腺に関しては、この方法を応用して、さらに分離した特定の生殖細胞のmiRNA発現プロファイル解析が可能となったが、課題として残された。

Mammalian microRNA(miRNA) function is unknown. The expression of miRNA is urgent. The development of new methods and the analysis of miRNA expression in gonads This time, we will use the product of 2-degree PCR to analyze the product successfully. The analysis results showed that 10,852 miRNAs, 11,744 small RNAs, 6,630 miRNAs (116 species), and 10,192 miRNAs (120 species) were successfully identified. The results of this study are as follows: 1 ~ 2. 2)About 30 miRNAs were identified in the sperm, egg, and other organs. 3) There are 18 identities of known miRNA when it is used in the second structural analysis, and new miRNA when it is used in the second structural analysis. 4)MiRNAs, miR-351, are involved in situ hybridization, and granular membrane cell-specific development. The results are in preparation for submission. In the present study, we have successfully developed a method for analyzing miRNA gene expression and its function, and identified tissue-specific miRNA genes. The method of gonadal isolation and miRNA discovery in specific germ cells is proposed.