精巣形成過程における生殖細胞に特異的なマイクロRNAの同定と発現解析

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哺乳類において、個々の組織・臓器に特異的なmicroRNA(miRNA)の機能は不明である。その解明のためには、個々の組織・臓器において、miRNAの発現プロファイルを明らかにすることが急務である。今回の萌芽研究で、その方法開発と、その応用としてマウス生殖腺におけるmiRNA発現プロファイル解析を行った。今回我々は2度PCRを行いその産物を用いることによりクローンの効率的なconcatenationに成功し、大量のクロ,_ニング解析が可能となった。この解析により、1)成獣マウス精巣、卵巣から、それぞれ10,852個、11,744個のsmall RNAをクローニングし、その内、6,630個(116種類)、10,192個(120種類)の既存のmiRNAのクローニングに成功した。従来の報告と比較し、1〜2桁オーダーの異なる、組織・臓器レベルのmiRNAプロファイル解析が可能となった。2)約30個の精巣、卵巣に特異的、または他の臓器と比較し優位な発現をしているmiRNAを同定した。3)クローニングされたもののうち、既知miRNAに当てはまらず、バイオインフォマティクスを用いたマウスゲノム上の2次構造解析より、新規miRNAを18個同定した。4)卵巣特的に発現しているmiRNAsのうち、miR-351に関してin situ hybridizationを行い、顆粒膜細胞に特異的に発現していることを明らかにした。成果は投稿準備中である。今回の萌芽研究により、種々の組織・臓器に応用可能なmiRNA発現プロファイル解析法の開発に成功し、miRNA機能解析のための組織特異的なmiRNAの同定が可能となった。生殖腺に関しては、この方法を応用して、さらに分離した特定の生殖細胞のmiRNA発現プロファイル解析が可能となったが、課題として残された。