小児固形腫瘍の根治を目指した腫瘍幹細胞標的療法の開発研究

肿瘤干细胞靶向治疗研发旨在彻底治愈小儿实体瘤

• 批准号: 17659553
• 负责人: 小室 広昭
• 金额: $ 1.73万
• 依托单位: University of Tsukuba
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2005
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2005 至 2006
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-17659553/
• 关键词: 腫瘍幹細胞; 小児がん; 固形腫瘍; FACS; side population細胞; ABCトランスポーター; verapamil; 神経芽腫

最近、腫瘍幹細胞の存在が注目されている。化学療法や放射線療法を中心としたこれまでの治療は腫瘍中のすべての細胞を平等に標的とした治療であり、腫瘍を作り出す責任細胞である腫瘍幹細胞が治療に抵抗性を示し生き残ってしまい、治療後にその残った腫瘍幹細胞が再び増殖を開始し、再燃が生じるものと理解される。従って、難治性腫瘍の根治を可能にするためには、この腫瘍幹細胞を同定し、それを標的とした新しい治療法の開発が重要と考えられる。Hoechst 33342というDNAに結合する蛍光色素を用いたFACS (fluorescence activated cell sorter)によるside population (SP)細胞分離法は多能性を持つ幹細胞を分離同定する非常に有用な手段である。本研究では、小児固形腫瘍におけるSP細胞の分離同定を目的として、FACSによる解析を行った。【方法】神経芽腫7株(SK-N-AS、SK-N-DZ、GOTO、LAN1、LAN5、NB16、NB19)、横紋筋肉腫4株(RMS、RD、SCMC-RM-2、KYM-1)、ユーイング肉腫5株(ES-1-OT、UTP-ES-1、SCMC-ES-1、RD-ES、SK-ES)を用いて、SP細胞の有無を検討した。細胞浮遊液にHoechst 33342を加えベクトンデッキンソン社のFACS Vantage SEを用いて解析を行った。さらに、ABCトランスポーター阻害薬のVerapami1を加えて解析を行った。【結果】検索した16株のうちユーイング肉腫の1株(RD-ES)でSP細胞は認められなかったものの、それを除く他の15株ではVerapami1感受性のSP細胞の存在が確認された。SP細胞の割合は0.028〜14.6%であった。【結語】腫瘍細胞株に存在するSP細胞は腫瘍を作り出す責任細胞である腫瘍幹細胞の訂能性が高く、ABCトランスポーター様の抗がん剤を細胞外へ排・出する機構を備えているものと思われた。今後、腫瘍の中にごくわずかに存在するこの幹細胞を標的にした新たな治療法の開発により難治性小児固形腫瘍の根治が可能になるものと期待される。

Recently, the existence of tumor stem cells has attracted much attention. Chemotherapy and radiation therapy are central to the treatment of tumors and the initiation of tumor stem cell regeneration. The development of new therapies for refractory tumors is an important consideration for the possibility of radical cure of these tumors. Hoechst 33342 is a very useful tool for DNA binding, FACS (fluorescence activated cell sorter), and side population (SP) cell isolation. In this study, SP cells were isolated and analyzed by FACS. [Methods] 7 neuroblastoma strains (SK-N-AS, SK-N-DZ, GOTO, LAN1, LAN5, NB16, NB19), 4 striated neuroblastoma strains (RMS, RD, SCMC-RM-2, KYM-1), 5 neuroblastoma strains (ES-1-OT, UTP-ES-1, SCMC-ES-1, RD-ES, SK-ES) were treated with medium and SP cells were examined. Cell suspension Hoechst 33342 was added to FACS Vantage SE for analysis. For example, ABC can be used to analyze the resistance of Verapami1. [Results] The presence of SP cells resistant to Verapami1 was confirmed in 16 strains (RD-ES) and 15 strains (RD-ES). SP cells cut and combine 0.028 ~ 14.6%. [Conclusion] Tumor cell lines exist in SP cells, which are responsible for tumor stem cells, and their activity is high. ABC cell lines are resistant to tumor stem cells, and their extracellular efflux mechanisms are prepared. In the future, stem cell targets will exist in tumors, and new therapies will be developed to cure refractory small solid tumors.