プロモーター解析のための部位特異的組換えトランスジェニックメダカの作成

创建用于启动子分析的位点特异性重组转基因青鳉

• 批准号: 18650095
• 负责人: 藤森 一浩
• 金额: $ 2.11万
• 依托单位: National Institute of Advanced Industrial Science and Technology
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2006
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2006 至 2007
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-18650095/
• 关键词: 神経科学; 遺伝子; 細胞・組織; バイオテクノロジー; 部位特異的組換え; 神経プロモーター; トランスジェニック; メダカ

(1)loxP標的挿人用TGメタガ系統(アクセプター)の樹立:本年度は、昨年度にマイクロインジェクションにより作製を開始したG0メダカが4月後半から5月に成魚になるため、それらを野生型メダカと交配することによりスクリーニングを行い、生殖細胞系列を超えて遺伝するファウンダーを2系統(13系統、07系統)選別した。このTGはGAP-43プロモータにより初期胚より神経系にのみGFPを発現するようデザインされているため容易にTGであることを検出可能であった。F3までwild typeとの掛戻し交配により、最終的により発現の強い13系統を残すことにした。このF4受精卵にCre部位特異的組換え酵素蛋白質をマイクロインジェクションしたところ、元の神経系におけるGFPシグナルが、約1週間後から消失を始めたことを確認した。しかし、驚くべきことことに全ての細胞ではなく、一部の細胞ではGFPの発現が残っていた。この現象は現時点では説明ができないが、今後ゲノム構造の解析をすすめなければならない。(2)プロモーター交換用loxPベクターの構築:ゲノム中に存在するloxPサイトに任意のプロモーター(あるいは新規プロモーター候補)を挿入するために、プロモーターの両端にloxPを保有するベクター(pTx)を開発した。これによって、毎回プロモーターをクローニングするたびにloxPを付与する必要がなくなった。この自作のクローニングベクターは独自のTEXシステムによりXcmlあるいはAhdIにより1塩基突端を作成するものである。このベクターにメダカゲノムよりPCRによってamplifyしたプロモーター候補をTAクローニングした。挿入したプロモーターは骨格筋・心筋で特異的に作動するものとしてTitin-cap遺伝子の上流2.5kbを用いた。以上の一部について、日本分子生物学会において報告を行った。

(1) Establishment of loxP target human TG system: This year, the production system of loxP target human TG system started from the second half of April to the third half of May, and the wild type TG system started from the second half of April to the third half of May, and the germ cell system started from the third half of April to the fourth half of May. This TG-43 is easy to detect in the early stages of the nervous system. F3 is a wild type and a strong 13 system. Cre site-specific component enzyme protein in F4 fertilized eggs was identified as GFP in the primary nervous system and disappeared after about one week. All the cells in the cell were found to be defective, and some of the cells were found to be defective. This phenomenon is explained by the present point and analyzed by the future structure. (2)Construction of loxP exchange: Any loxP exchange (candidate for new loxP exchange) in the presence of loxP in the exchange is opened to the public. This is the first time that I've ever had a problem. This is the first time I've ever seen someone who's been working on a project like this. This is the first time I've ever seen a woman who's been in a relationship with someone else. The 2.5kb upstream of the titin-cap gene is used in the operation of the titin-cap gene. The above is a report by the Japanese Molecular Biology Society.

项目成果

TEX法を用いた細胞種特異的プロモーターの解析

使用 TEX 方法分析细胞类型特异性启动子

• 发表时间: 2007
• 作者: Kassai H;Terashima T;Fukaya M;Nakao K;Sakahara M;Watanabe M;Aiba A.;Baba K;Yamada M;Baba K;Doi K;Ichinohe N;高野 愛;Dekimoto H;山田 真弓;Yan Jin;藤森 一浩
• 通讯作者: 藤森 一浩