骨格筋不死化細胞に由来する筋知覚神経軸索伸長因子の解析とクローニング

永生化骨骼肌细胞肌肉感觉神经轴突生长因子的分析与克隆

• 批准号: 15700282
• 负责人: 藤森 一浩
• 金额: $ 1.6万
• 依托单位: National Institute of Advanced Industrial Science and Technology
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2003
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2003 至 2004
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-15700282/
• 关键词: 筋知覚神経; 軸索伸長因子; 後根神経節; 不死化細胞株; 再生医学; 骨格筋; クローニング; L6細胞

本研究の目的は、障害を受けた末梢神経,特に筋収縮情報を中枢へ伝達する筋知覚神経の再生をめざして,ラット筋芽細胞由来の知覚神経軸索伸長因子を生化学的に同定し、クローニングすることである。そこで平成16年度は平成15年度の成果を踏まえ以下の研究を行った.ラット筋芽細胞株L6より,すでに平成15年度に確立した方法で伸長活性を有するL6培養上清(L6CM)を調製し,生化学的方法により濃縮を行い,MS/MS解析を行った.その結果Pigent epithelium-derived factor(PEDF)という黒色色素細胞に由来する成長因子が複数のバンドで検出された.そこで,本年度はPEDFをラットL6細胞よりRT-PCRによりクローニングし,大腸菌発現ベクターpGEX6Pベクターにサブクローニングし,大腸菌においてepitope-tagging融合蛋白質として発現させ調製した.しかし,これらの蛋白質にはニワトリ胚由来後根神経節細胞器官培養系における軸索伸長評価系においてL6CMに認められるような顕著な活性は認められなかったが,シュワン細胞の遊走性を活性化することが明らかになった.したがって,PEDFはL6CMにおける筋知覚神経の神経軸索伸長活性の本体ではないと予想された.そこで,さらに他のバンドに由来する分子を検討したところ,Insulin like Growth Factor I Binding Protein 6(IGFBP6)が見出された.IGFそのものはMS/MS解析では範囲外のバンドであったが,IGF-Iが本体である可能性が示唆されたので,IGFの効果を検証したところ,L6CMと同等の活性があることが明らかになった.IGF-Iの筋知覚神経軸索の伸長活性の分子機序については未だ不明の部分が多いが,今後,IGF-I/IGFBP6複合体の筋知覚神経の軸索伸長における作用機序,またin vivo除神経モデル動物における神経軸索再生時の作用機序についてさらなる研究が必要である.

In this study, the purpose of this study is to prevent the injury of the peripheral gods, and to pay special attention to the central emotional report center to know that the nerves are regenerated, and that the sprouts of the growth factors are the same as those of biochemistry. The achievements of Pingcheng in 16, Pingcheng in 15, and the following research achievements. The cell strain L6 was isolated from L6, and the activity of L6 culture supernatant (L6CM) in 15 years was determined by biochemical method, MS/MS analysis and biochemical method. The results showed that the origin of melanin cells in Pigent epithelium-derived factor (PEDF) was affected by the complex number of growth factors. This year, PEDF

项目成果

Muscle-specific protein MDP77 specifically promotes motor nerve regeneration in rats

• DOI: 10.1016/j.neulet.2004.02.058
• 发表时间: 2004-04-29
• 期刊: NEUROSCIENCE LETTERS
• 影响因子: 2.5
• 作者: Itoh, S;Uyeda, A;Taguchi, T
• 通讯作者: Taguchi, T