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クロマチン構造変換のナノスケール3次元電子顕微鏡解析

纳米级三维电子显微镜分析染色质结构转变

基本信息

批准号：
18657035
负责人：
森川耿右
金额：
$ 2.18万
依托单位：
Osaka University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2006
资助国家：
日本
起止时间：
2006 至 2007
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-18657035/
关键词：
生体分子転写制御電子顕微鏡可視化ナノバイオ

项目摘要

昨年度のテトラヌクレオソームの電子顕微鏡観察に引き続き、今年度はヌクレオソームの数を増やして15個、20個連なったオリゴヌクレオソームの、負染色法による電顕観察を行い、新たにクライオ電子顕微鏡観察も試みた。構造解析に適したDNA配列601からなるプラスミドDNAを構築し、大腸菌で発現、精製したコアヒストンを用いてオリゴヌクレオソームを再構成した。2%酢酸ウラニルを用いて負染色した試料を、電子顕微鏡によって観察し、15個、20個のモノヌクレオソームが数珠状に連なったオリゴヌクレオソームの形成が確認できた。また、金属イオンの存在下で、高度にパッキングした30nm fiber様の形態も観察できた。更にクロマチンリモデリング因子であるFACTと、このオリゴヌクレオソームの相互作用を観察するため、FACTのSSRP1とSPT16の二つのサブユニットを共発現させ、複合体の精製を行った。FACT複合体の電子顕微鏡観察を行ったところ、様々なサイズの粒子が観察され、FACTがオリゴマー状態で存在する事が示唆された。一部15nmほどの大きさの分子が検出され、これがFACTモノマーであると推定された。このFACT複合体を上記のオリゴヌクレオソーム溶液に加え、その形態の時間変化を負染色法によって電顕で観察した。しかしながら現在のところ、有意な変化を見いだすには至っていない。現在、溶液中の状態をより正確に反映するクライオ電子顕微鏡観察を開始しており、オリゴヌクレオソームの凍結試料の観察に既に成功し、負染色法と同様の数珠状に連なった形態を観察できた。電子分光法を用いることで無染色であるにも関わらず、良質の画像の記録に成功し、DNAも明確に可視化する事ができた。

Last year, the number of electronic microscope examinations increased to 15, 20 and negative staining methods, and the number of electronic microscope examinations increased to 15 and 20 respectively. Structure analysis: DNA alignment 601: Construction of DNA, development of Escherichia coli, purification of DNA, reconstruction of DNA 2% acetic acid, negative staining, electron microscopy, 15, 20, and the formation of bead-like rings were confirmed. In the presence of metal particles, the morphology of the 30nm fiber was observed. In addition, FACT, SSRP1 and SPT16 of FACT and SPT16 of SPT 16 are detected by interaction of FACT and SPT 16, and the purification of complex is carried out. The electron microscope of FACT complex is used to detect the particles and the state of FACT. A part of the 15nm high molecular weight is detected and estimated. The FACT complex was observed by negative staining method. "I'm not going to be able to do that." Now, the state of the solution is correctly reflected, the electron microscope examination is started, the examination of the frozen sample is successfully carried out, and the negative staining method is the same as the number of beads. Electron spectroscopy is used to record and visualize DNA without staining.

项目成果

期刊论文数量（14）

专著数量（0）

科研奖励数量（0）

会议论文数量（0）

专利数量（0）

Structures of the extracellular regions of the group II/III metabotropic glutamate receptors

DOI：
10.1073/pnas.0611577104
发表时间：
2007-03-06
期刊：
PROCEEDINGS OF THE NATIONAL ACADEMY OF SCIENCES OF THE UNITED STATES OF AMERICA
影响因子：
11.1
作者：
Muto, Takanori;Tsuchiya, Daisuke;Jingami, Hisato
通讯作者：
Jingami, Hisato

Structural insights into the PIP2 recognition by syntenin-1 PDZ domain.