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タンパク質による5SrRNAの立体構造識別

蛋白质对5SrRNA三维结构鉴定

基本信息

批准号：
61580234
负责人：
森川耿右
金额：
$ 0.64万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
财政年份：
1986
资助国家：
日本
起止时间：
1986 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-61580234/
关键词：
高度好熱菌 5srRNA リボゾームタンパク質

项目摘要

高度好熱菌Thermus thermophilus HB8を大量培養し、約300gの菌体を得た。菌体からフェノール法によって5SrRNAを抽出し、セファデックスG100カラムクロマトグラフィーにかけて約20mgの試料を得た。この5SrRNA試料から0.5mm角程度の大きさの結晶が得られるが、規則性が低いためX線構造解析には使用できない。5SrRNAは3種のリボゾームタンパク質と特異的に結合する。核酸とタンパク質の複合体は前述の裸のRNAに比べてX線解析のために質の良い結晶を与える可能性がある。複合体を結晶化し、構造解析することに成功すれば、リボゾームタンパク質が5SrRNAの立体構造を識別し、結合する機構をより直接的に解明することができる。大腸菌の5SrRNAにRNaseAを限定的に作用させると、約半分の大きさの安定な断片を得ることができる。この断片はリボゾームタンパク質L25と特異的に結合することが知られている。そこで、先ず高度好熱菌Thermusthermophilus HB8の5SrRNAから同じ断片が得られるか否かを検討した。その結果、特定の条件下でRNaseAを作用させると類似した大きさの断片が得られることが判明した。この断片をゲル電気泳動にかけると、Urea存在下では数本のバンドに分かれるが、非存在下では1本のバンドを与える。末端ラベル法で各バンドの断片の塩基配列を決定した結果、1-13,91-122,71-122,73-122の断片が安定なRNase抵抗性の複合体をつくることが判明した。大腸菌の5srRNAとの比較から、この断片がL25と結合することは疑いない。更に、このRNase抵抗性断片をカラムクロマトグラフィーで単離し、結晶化することにも成功した。結晶は充分な大きさを持つが、不安定な性質のためX線回析像をとることはまだ成功していない。

A large number of highly good bacteria Thermus thermophilus HB8 were cultured, and about 300g of bacteria were obtained. The bacteria were extracted by 5SrRNA, and the 20mg was extracted by the method of cell culture. The 0.5mm angle of the 5SrRNA system is high. The results show that the temperature is high, and the standard low temperature X-ray is used in the analysis of the system. The combination of 5SrRNA's three kinds of special features of the traditional Chinese medicine. The nucleic acid sequence is different from the previous one. The naked RNA is compared to the X-ray analysis of the nucleic acid sequence and the possibility. The complex was crystallized, the data was successfully analyzed, the 5SrRNA was created by the computer, and the data was directly explained by the computer system. The fragments of action and diazepam defined by 5SrRNA "RNaseA" can be divided into two parts: diazepam and valium. Please tell me that the combination of the fragment and the L25 special device knows how to do it. First of all, the height of the bacteria, Thermusthermophilus HB8, 5SrRNA, and fragments are the same as those of the same fragments. The results show that under certain conditions, the effect of the RNaseA is similar to that of the fragment. In the presence of Urea, there are several parts of the computer, and in the case of non-existence, there are two parts of the computer, one of the most important parts of the system. The end-to-end method was used to determine the results of each fragment, 1-13, 91-122, 71-122, 73-122, diazepam, RNase resistance, complex, diazepam, diazepam, and complex. The results of 5srRNA test and L25 test were compared with each other, and the results were suspected. The RNase-resistant fragments were isolated and crystallized successfully. The results showed that the X-ray analysis of the stability and instability of the disease showed that it was successful.