無傷植物におけるジベレリンの可視化技術の開発

完整植物中赤霉素可视化技术的开发

• 批准号: 18658046
• 负责人: 鈴木 義人
• 金额: $ 2.05万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2006
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2006 至 2007
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-18658046/
• 关键词: 可視化; 植物; ディスプレイ; 植物ホルモン

本研究は外来性の2種のタンパク質のジベレリン(GA,植物ホルモンの一種)依存的な会合を利用して,生きた植物におけるジベレリンの可視化を通して,その局在性を明らかにする技術の開発を目的としている。昨年度までに抗活性型ジベレリン抗体とGA4依存的に結合する12アミノ酸からなる2種のペプチドを特定した。本年度は,この結合に関する詳細な解析を行い,応用研究の妥当性を検討した。活性型ジベレリンを認識する2種の抗体を所有しているが,得られたペプチドの結合がスクリーニングに用いた8/E9抗体に特異的か否かを検討した結果,8/E9抗体にはGA4依存的に結合するが,他方の抗体(21/D13)には結合しないことが判明したことから,ペプチドは少なくとも一部,抗体の部分構造と相互作用していることが判明した。次に,8/E9にGA4と同様に認識されるGA1および,認識されないGA20を用いて結合をみたところ,GA4によってのみ結合が示された。GA1はGA4に比べ,8/E9には認識されない水酸基を一つ多く持っており,この水酸基が結合を阻害することから,GA4の当該箇所と抗体の部分構造との疎水結合等によって変化する構造,あるいはGA4の当該箇所とペプチドが相互作用しているものと思われた。以上のペプチドの持つ特性から,8/E9抗体とペプチドを利用すれば,サンドイッチELISAに類似のGA4特異的な検出法が確立すると考えられ,検討した結果,約30pgの検出感度でGA4が特異的に検出できることが判明した。さらに,親和性や結合のGA4依存性を高める事を期待して,2種のペプチドの内,1種について各アミノ酸をアラニンに置換したクローンを作成したところ,1つのアミノ酸を除いて全てのアミノ酸が結合に必須であることが示された。現在,PCAあるいは新たに考案した植物における2分子結合の検出系の開発を進めている。

This study aims to develop technologies for the utilization and visualization of two kinds of exotic plant species (GA, one kind of plant species) dependent on genetic diversity, and for the development of natural diversity technologies. In the past year, two kinds of anti-active antibodies and GA4-dependent binding agents were selected. This year, we will conduct a detailed analysis of the relevant aspects of the study and discuss the appropriateness of the use of research. The results showed that the GA4-dependent binding of 8/E9 antibody was detected, and the binding of other antibody (21/D13) was detected. Some of the structural interactions of antibodies were identified. Next, 8/E9 GA4 and GA1 are recognized, GA20 is recognized, and GA4 is recognized. GA1 and GA4 have different structures, such as the structure of GA1 and GA4, and GA8 and E9 have different structures. GA4 and GA4 have different structures, such as the structure of GA1 and GA4. 8/E9 antibody was identified by ELISA using a similar GA4-specific detection method. The results showed that the GA4-specific detection sensitivity was approximately 30pg. In addition, the affinity and binding of GA4 are expected to be highly dependent. Among the two kinds of selection, one kind of selection is required for each acid. Now,PCA has developed a new research project for plants, two molecular binding systems.

项目成果

抗活性型ジベレリン抗体の抗メタタイプペプチドのスクリーニング

筛选抗活性赤霉素抗体的抗亚型肽

• 发表时间: 2008
• 作者: 稲葉絢子;浅見忠男;鈴木義人
• 通讯作者: 鈴木義人