トランスポゾンを用いたアクティベーションタギング系の開発と応用

转座子激活标记系统的开发及应用

• 批准号: 09760113
• 负责人: 鈴木 義人
• 金额: $ 1.34万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1997
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1997 至 1998
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-09760113/
• 关键词: アクティベーションタギング; トランスポゾン; シロイヌナズナ; タバコ

本研究においては、シロイヌナズナの個体レベルでの変異形質の選抜を可能にする新規activationtagging(AT)系を確立し、植物ホルモンのシグナル伝達系の解析に応用することを目的としている。昨年度作成した数種のトランスポゾン型のAT用タギングエレメントのシロイヌナズナにおける転位様式をPCR,サザンブロッティングにより解析した.タバコの場合と異なりシロイヌナズナでは転位の指標となるスペクチノマイシン耐性遺伝子が正常に機能せず、また,ゲノム解析ではsomaticとgerminal転位の区別が明瞭でないため,germinal転位率を算出する事が出来なかった。転位によって生じるemptydonorsiteの検出率が高かったREH-Cと名付けたタグエレメントをその後の研究に使用することに決定し,本エレメントを導入した約2000の形質転換体及びその後代種子を調製した.これらのトランスポゾンの転位により新たな変異を含んでいると考えられる後代種子およびストックセンターより入手可能なT-DNA ATラインを対象に胚軸伸長に関わる変異体のスクリーニングを行った.その結果,通常の栽培条件下で野生型より長い胚軸を有する変異体が1種得られた.形質転換マーカーや形質の遺伝学的解析により,この変異は劣性であり,挿入されたT-DNAによる可能性が高いことが示された.プラスミドレスキューによりT-DNA近傍にゲノムDNAを回収し,シーケンス解析をしたところ,2個以上のT-DNAが複雑な挿入様式で導入されていることが判明した.また,これまでに配列が決定された約600bpの領域には既知の配列との相同性が認められなかった.優性の変異体を得るべく,さらに種々のスクリーニングを継続している.

In this study, we established a new activationtagging(AT) system for the identification and analysis of plant heteromorphic species. A number of different types of DNA have been created in the past year. In the case of different situations, the index of the reverse position is calculated. The index of the reverse position is calculated. The index of the reverse position is calculated. The detection rate of emptydonorsite was high. REH-C was determined by the use of the seed after the study. The seed was introduced into the seed of about 2000 generations. The first step is to start with T-DNA AT gene, which is related to embryo elongation. Under normal cultivation conditions, wild type, long hypocotyl, and allogeneic species were obtained. The genetic analysis of morphological and qualitative changes shows that there is a high possibility of T-DNA insertion. T-DNA analysis shows that more than two T-DNA fragments are introduced into the DNA sequence. The identity of the sequence determined by the sequence is approximately 600bp in the domain of the known sequence. The quality of the product is different from the quality of the product, and the quality of the product is different.