いかなる変異に対しても特異的な新規RNA干渉法のin vivoでの有効性の検討

检查针对任何突变的新型 RNA 干扰方法的体内有效性

• 批准号: 18659256
• 负责人: 久保寺 隆行
• 金额: $ 2.11万
• 依托单位: Tokyo Medical and Dental University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2006
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2006 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-18659256/
• 关键词: siRNA; ALS; 遺伝子治療; トランスジェニックマウス; SOD1

(1)siRNA抵抗性SOD1トランスジェニックマウスの作製ヒトSOD1の中でsiRNAの標的部位となる塩基配列を,そのコドンよりコードされるアミノ酸は変えないように,変換できる塩基をすべて置換し,siRNA抵抗性ヒト野生型SOD1発現ベクターを作製した。siRNA抵抗性ヒト野生型SOD1発現ベクターを受精卵にマイクロインジェクションし,siRNA抵抗性SOD1トランスジェニックマウスを作製した。作製したマウスの確認は尾から蛋白質を抽出しウエスタンブロッティング法でヒト野生型SOD1の発現を確認することによって行った。(2)ダブルトランスジェニックマウスの作製作製したsiRNA抵抗性SOD1トランスジェニックマウスのオスとSOD1-siRNAトランスジェニックマウスのメスとを体外受精させSOD1-siRNAトランスジーンとsiRNA抵抗性SOD1トランスジーンの両方を有するダブルトランスジェニックマウスを作製した。尾から抽出したゲノムDNAからPCR法で両方のトランスジーンを確認することによってマウスの確認を行った。過剰発現した野生型SOD1は,ウエスタンブロッティング法でsiRNAに抵抗性であり,内因性SOD1の低下を補った。(3)ダブルトランスジェニックマウスの解析ダブルトランスジェニックマウスにおいて野生型SOD1のタンパクが補われ,さらに赤血球中のSOD1の酵素活性が内因性SOD1と同程度にまで回復していることを示した。

(1) siRNA-resistant SOD1 gene expression is controlled by the substitution of siRNA-resistant SOD1 gene with siRNA-resistant wild type SOD1 gene. siRNA-resistant wild-type SOD1 is found in fertilized eggs, and siRNA-resistant SOD1 is inhibited. The expression of wild-type SOD 1 was confirmed by PCR. (2)The siRNA resistance SOD1-siRNA is produced in vitro. DNA extraction and PCR were used to confirm the origin of the virus. Wild type SOD 1 was found to be resistant to siRNA, while endogenous SOD 1 was found to be low. (3)The enzyme activity of SOD 1 in erythrocytes was restored to the same extent as that of endogenous SOD 1.

项目成果

siRNAの核酸医薬としての可能性

siRNA作为核酸药物的潜力

• 发表时间: 2006
• 期刊: 分子細胞治療 5
• 作者: Song Z;Suzuki K;et. al.;横田隆徳;横田隆徳
• 通讯作者: 横田隆徳

RNA干渉によるアルツハイマー病治療の可能性

利用 RNA 干扰治疗阿尔茨海默病的可能性

• 发表时间: 2006
• 期刊: Progress in Medicine 26
• 作者: Uezu A.;Horiuchi A.;Araki N.;et.al.;佐藤靖史;横田隆徳
• 通讯作者: 横田隆徳

siRNAを用いたALSの遺伝子治療

使用 siRNA 治疗 ALS 的基因疗法

• 发表时间: 2007
• 期刊: 医学のあゆみ。 (印刷中)
• 作者: Kosaka H.;Yoshimoto T.;Fujimoto J.;et.al.;横田隆徳
• 通讯作者: 横田隆徳

Increase of disease duration of amyotrophic lateral sclerosis in a mouse model bytransgenic small interfering RNA.

通过转基因小干扰RNA延长小鼠模型中肌萎缩侧索硬化症的病程。

• 发表时间: 2007
• 期刊: Archives Neurology 64
• 作者: Yokota T;Sasaguri H;Saito Y;Yamada H;Unno N;Yamamoto T;Kubodera T;Anzai M;Mitani T;Mizusawa H.
• 通讯作者: Mizusawa H.

神経変性疾患のサイエンス

神经退行性疾病科学

• 作者: Watanabe;M;Shingo Kikuchi;Wataru Yamori;Kozo Morimoto;Toshiki Yabe;Toshiki Yabe;菊地 真吾;Toshiki Yabe;Shingo Kikuchi;Wataru Yamori;H.A.Popiel;I.Mizuta;H.Xiong;T.Chiyonobu;N.Fujikake;S.Kariya;Y.Nagai;I.Mizuta;水澤英洋;葛原茂樹;高橋良輔
• 通讯作者: 高橋良輔