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膜蛋白のプロテオーム解析による神経膠芽腫浸潤関連分子の同定と機能解析

通过膜蛋白蛋白质组分析鉴定胶质母细胞瘤侵袭相关分子并进行功能分析

基本信息

批准号：
18659416
负责人：
濱田潤一郎
金额：
$ 2.05万
依托单位：
Kanazawa University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2006
资助国家：
日本
起止时间：
2006 至 2008
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-18659416/
关键词：
脳神経疾患プロテオームマイクロアレイ

项目摘要

1, 神経膠芽腫細胞初代培養細胞と神経膠芽腫細胞株から高浸潤細胞と低浸潤細胞の分離抽出神経膠芽腫10例の手術材料から初代培養細胞を確立した。当教室で確立されているin vitro細胞遊走assayを用いて、上記の初代培養細胞と世界的に広く使用されている7種類の神経膠芽腫細胞株(U87, U251, T98G, SNB19, U118, SF 767, G112)からそれぞれ高遊走細胞と非遊走細胞を収集した。2, 細胞膜蛋白の分離とプロテオミクス解析による浸潤細胞特異的膜蛋白の同定過去の報告(Nunomura K, et al, Mol Cell Proteomics 2005)に倣い、細胞膜蛋白の抽出を行う。すなわち、上記で回収した細胞の細胞膜を細胞膜不透過性型ピチオンでラベリングし、細胞を溶解、アビジンカラムを用いて細胞膜のみ分離抽出した。得られた細胞膜蛋白はmass fingerprintingとMALDI(Matrix-assisted laser desorption/ionization,マトリックス支援レーザ脱離イオン化)-TOF(Time-of-flight/飛行時間型)analysisにより網羅的なアミノ酸解析から蛋白プロファイルを作成した。高遊走細胞と非遊走細胞で発現に差がある膜蛋白の同定中であり、浸潤細胞で機能している候補膜蛋白を特定中である。神経膠芽腫初代培養細胞と神経膠芽腫細胞株で共通し、新規性の高い10個の候補分子を優先分子とした。また、非遊走細胞と比較し、高遊走細胞で高い発現を示す膜蛋白と低い発現を示す膜蛋白を同定した。

1. Primary culture of glioma cells and glioma cell strains were established from 10 surgical specimens. When the in vitro cell migration assay was established in the classroom, seven kinds of glioma cell lines (U87, U251, T98G, SNB19, U118, SF767, G112) were used in the primary culture cells and the world. 2. Cell membrane protein isolation and analysis, identification of infiltrating cell-specific membrane proteins (Nunomura K, et al, Mol Cell Proteomics 2005). The cell membrane impermeability type of the cell membrane can be separated from the cell membrane by cell lysis and cell lysis. Cell membrane protein mass fingerprinting and MALDI(Matrix-assisted laser desorption/ionization)-TOF(Time-of-flight)analysis were obtained. High wandering cells and non-wandering cells are found in different membrane proteins, while infiltrating cells are found in different membrane proteins. There are 10 candidate molecules in common and new patterns between primary culture cells and glioma cell lines. High and low expression of membrane proteins in non-migratory cells were compared.