尝试结晶prestin〜旨在阐明使听力敏感的运动蛋白的结构〜-猫眼课题宝

尝试结晶prestin〜旨在阐明使听力敏感的运动蛋白的结构〜

批准号：

18659495

负责人：

和田仁

金额：

$2.11万

依托单位：

Tohoku University

依托单位国家：

日本

项目类别：

Grant-in-Aid for Exploratory Research

财政年份：

2006

资助国家：

日本

项目状态：

已结题

起止时间：

2006 至 2007

来源：

https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-18659495/

关键词：

分子モータ膜タンパク質 Prestin 2次元結晶原子間力顕微鏡国際研究者交流スイス

项目摘要

项目成果

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中文摘要

翻译

哺乳類の聴覚は内耳外有毛細胞の伸縮運動により鋭敏なものになっている.その伸縮運動の源は細胞側壁に高密度に発現しているタンパク質モータprestinの構造変化であると考えられている.Prestinについてその同定以来様々な研究が行われてきたが,prestinの形状や構造変化メカニズムは解明されていない.そこで本研究では,prestinの2次元結晶を作製し,その結晶を用いて,原子間力顕微鏡によるprestinの原子レベルでの可視化を目指した.本研究では,まず,これまでに構築したFLAGタグ融合型prestinを安定発現する細胞からprestinを精製した.精製したサンプルをSDS-PAGEで評価し,以降の実験に十分な純度まで精製できていることを確認した.また,細胞上のprestinの構造の安定性を検討した結果,サリチル酸ナトリウムが存在するとprestinの構造が安定することが明らかになった.これはprestinの結晶を作製する際にサリチル酸ナトリウムを添加すると良いことを示唆している.さらに,FLAGタグ融合型prestinを安定発現する細胞の細胞膜を単離し,細胞膜中のFLAGタグ融合型prestinをQ dotで標識した.そして,それを原子間力顕微鏡を用いて,Q dotを示す粒子の周辺の構造物の詳細な形状を観察した.その結果,prestinを示すと考えられる4つの突起を有し直径10nm前後の構造体を観察することが出来た.

英文摘要

期刊论文(16)

专著(0)

科研奖励(0)

会议论文

Misfolding and mislocalization by mutations of the motor protein prestin

运动蛋白 prestin 突变导致的错误折叠和错误定位

DOI： --

发表时间： 2007

期刊：

影响因子： --

作者：

[高野哲至, 村松真臣, 村上亮, 並木亮, 高橋義朗, Michio Murakoshi, 熊野峻, 熊野峻, 熊野峻, 熊野峻, 熊野峻]

通讯作者：熊野峻

Immune Atomic Force Microscopy of the Plasma Membrane of Prestin-Transfected Chinese Hamster Ovary Cells Using Quantum Dots

使用量子点对 Prestin 转染的中国仓鼠卵巢细胞质膜进行免疫原子力显微镜检查

DOI： --

发表时间： 2008

期刊：

影响因子： --

作者：

[Manase K, Endo T, Chida M, Nagasawa K, Honnma H, Yamazaki K, Kitajima Y, Goto T, Kanaya M, Hayashi T, Mitaka T, Saito T., Michio Murakoshi]

通讯作者： Michio Murakoshi

Contribution of the GTSRH sequence to the folding of prestin: refolding of transport-defective prestin mutants by salicylate

GTSRH 序列对 prestin 折叠的贡献：水杨酸对运输缺陷 prestin 突变体的重折叠

DOI： --

发表时间： 2008

期刊：

影响因子： --

作者：

[M. Rashel, 松崎茂展, 内山淳平, 前田良浩, 竹村伊代, 今井章介, 鳥飼源史, Izumi-Nagai K, Izumi-Nagai K, Yokoi M, Yokoi M, Jin XH, 大野重昭, 古館直樹, Jin X H, Suzuki Y, Jin XH, 吉田和彦, Ohno S, Ohno S, 嶋澤雅光, 嶋澤雅光, 嶋澤雅光, Nakashima M, Sato D, Yoko Kitsunai, Hiroshi Wada, Michio Murakoshi, Michio Murakoshi, Michio Murakoshi, Toshihiro Matsui, Michio Murakoshi, Shun Kumano]

通讯作者： Shun Kumano

Imaging by atomic force microscopy of the plasma membrane of prestin-transfected Chinese hamster ovary cells

DOI： 10.1007/s10162-006-0041-z

发表时间： 2006-09-01

期刊：

JARO-JOURNAL OF THE ASSOCIATION FOR RESEARCH IN OTOLARYNGOLOGY

影响因子： 2.4

作者：

[Murakoshi, Michio, Gomi, Takashi, Wada, Hiroshi]

通讯作者： Wada, Hiroshi

Analysis of the Dynamic Behavior of the Inner Hair Cell Stereocilia by the Finite Element Method

DOI： 10.1299/jsmec.49.828