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脳内1細胞FRETイメージングによる神経極性研究

使用大脑中单细胞 FRET 成像进行神经极性研究

基本信息

批准号：
19650076
负责人：
千原崇裕
金额：
$ 2.11万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2007
资助国家：
日本
起止时间：
2007 至 2008
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究の目標は、神経発生過程におけるカスパーゼの活性化変動を、脳内の1神経細胞で検出することである。昨年度(平成19年度)は、ショウジョウバエ成体脳においてFRETを用いたカスパーゼ活性化検出プローブ:SCATを発現させFRETの解消パターン検出を試みたが、定量的な解析に耐えうる結果を得られなかった。その後も、SCATプローブの最適化、検出系の改良などを精力的に行ったが、SCATプローブを用いての(生体内)神経繊維におけるカスパーゼ活性化検出は困難であった。このような状況を踏まえ、今年度は、カスパーゼが活性化している神経細胞の同定を「PARP-Venus (Nat Neurosci. 9. 1234-6, 2006)」を用いて行った。PARP-Venusは、神経繊維などの細い細胞突起などでもカスパーゼの活性化を検出する事ができるプローブとして開発された。すべての神経細胞に発現するELAV-Ga14ドライバーを用いてPARP-Venusを強制発現し、生体内神経細胞におけるカスパーゼの活性化パターンを、胚期、幼虫期、蛹期、成虫期において解析したところ、特に成虫脳において興味深いカスパーゼ活性化パターンを見いだすことに成功した。例えば、羽化直後と加齢した成虫脳において、それぞれ特異的な神経細胞でカスパーゼは活性化していた。今後は、この時期・細胞種特異的なカスパーゼの活性化パターンの生理学的意義について迫る予定である。また、SCATプローブを用いた「脳神経細胞内カスパーゼの動的変化」についても引き続き解析を行っていく予定である。

The purpose of this study is to investigate the activation of neurons in the process of neurogenesis. Last year (2019), SCAT was able to detect FRET and detect it quantitatively. SCAT optimization, detection system improvement, energy management, SCAT optimization, and activation of SCAT in vivo are difficult. This year, the activity of neurons is determined by PARP-Venus (Nat Neurosci). 9. 1234-6, 2006). PARP-VENUS is the first to develop a process for the activation of neurons. ELAV-Ga14 was successfully activated in the embryonic, larval, pupae and adult stages of the nervous system. For example, after emergence, it is necessary to increase the activity of adult cells. In the future, this period·cell species-specific SCAT is used to analyze the changes in the cellular dynamics of the brain.