ENUミュージェネシスにおける高速突然変異検出法

ENU mugenesis中的快速突变检测方法

• 批准号: 19650106
• 负责人: 真下 知士
• 金额: $ 2.11万
• 依托单位: Kyoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2007
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2007 至 2008
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-19650106/
• 关键词: ラット; ミュータジェネシス; トランスポゾンMu; スクリーニング; ポジショナルクローニング; ゲノムDNA; メッセンジャーRNA

ラットENUミュータジェネシスにより作製された多数のミュータント動物の中から、標的遺伝子に点突然変異の導入された個体のみを効率的に検出するスクリーニング方法の開発を目的とした。(1)ENU誘発突然変異動物群のゲノムDNAスクリーニング法の開発我々はこれまで、約5000匹のENU誘発突然変異ラットのDNAバンクと精子バンクをアーカイブとして保存した。スクリーニング方法についての以下の点を検討した。1)蛍光標識Mu-END DNAによるMu反応。2)自動キャピラリー電気泳動装置(ABI3100)による電気泳動法。3)コンピューター解析により標的遺伝子の点突然変異保有個体を検出方法。以上の結果、一つの標的遺伝子(10プライマーセット)を対象にラットミュータントアーカイブ5000をスクリーニングするのに、一ヶ月(約20日)で実施可能な高速スクリーニング方法(MuT-POWER)を開発することができた。(2)突然変異動物個体のメッセンジャーRNAスクリーニング標的遺伝子合成cDNAプローブとENU誘発突然変異個体由来メッセンジャーRNA (mRNA)をハイブリダイゼーションさせ、Mu反応により点突然変異遺伝子を同定する方法について検討した。ENU誘発突然変異個体から十分量のmRNAを抽出して、標的遺伝子cDNAプローブとハイブリダイゼーションさせ、Mu反応で検討したが、検出感度の限界のために未知の点突然変異を効率的に検出することができなかった。本mRNA法については、引き続き感度を上げるなどの検討が必要である。

The purpose of this method is to control the sudden change in the center and target of most of the animals and to introduce them into the center and target of the animal. (1)ENU induces the development and preservation of DNA in mutant faunas, and about 5000 ENU-induced mutant DNA are preserved. The following points are discussed in detail in the method of selecting and selecting. 1) Mu-END DNA marker Mu-END DNA marker Mu-END 2)Electric swimming method in the automatic camera electric swimming device (ABI3100). 3) The method of individual detection is suddenly changed when the target gene is analyzed. As a result of the above, a target gene (10 levels) was developed for a target gene (5000), and a possible high-speed gene mutation method (MuT-POWER) was implemented for a month (about 20 days). (2)The method for identifying the mutant RNA (mRNA) from the mutant DNA is discussed. ENU induced mutation is detected in a very high amount of mRNA, and the target gene cDNA is detected in a very high amount of mRNA. This mRNA method is necessary to detect and detect the presence of the virus.

项目成果

A comprehensive QTL analysis of serum cholesterol levelsbefore and after a high-cholesterol diet in SHRSP.

SHRSP 高胆固醇饮食前后血清胆固醇水平的全面 QTL 分析。

• 发表时间: 2007
• 期刊: Physiological Genomics 30
• 作者: Mashimo T;et. al.
• 通讯作者: et. al.

Progress and prospects in rat genetics: a community view

• DOI: 10.1038/ng.147
• 发表时间: 2008-05-01
• 期刊: NATURE GENETICS
• 影响因子: 30.8
• 作者: Aitman, Timothy J.;Critser, John K.;Worley, Kim
• 通讯作者: Worley, Kim

NBRP-Ratの概要とラット胚・精子の保存状況

NBRP-Rat概述及大鼠胚胎和精子的保存状况

• 发表时间: 2007
• 期刊: 実験動物技術 42(1)
• 作者: 滝澤明子;他
• 通讯作者: 他

ENUミュータジェネシスを利用した標的遺伝子変異ラツトの作製方法

利用ENU诱变创建靶向基因突变大鼠的方法

• 发表时间: 2008
• 作者: 真下知士;芹川忠夫;真下知土
• 通讯作者: 真下知土

標的遺伝子変異ラット作製のためのENUミュータントアーカイブ

用于创建目标基因突变大鼠的 ENU 突变档案

• 发表时间: 2008
• 作者: Mashimo T;et al.;他6人;真下知士
• 通讯作者: 真下知士