ENUミュージェネシスにおける高速突然変異検出法

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ラットENUミュータジェネシスにより作製された多数のミュータント動物の中から、標的遺伝子に点突然変異の導入された個体のみを効率的に検出するスクリーニング方法の開発を目的とした。(1)ENU誘発突然変異動物群のゲノムDNAスクリーニング法の開発我々はこれまで、約5000匹のENU誘発突然変異ラットのDNAバンクと精子バンクをアーカイブとして保存した。スクリーニング方法についての以下の点を検討した。1)蛍光標識Mu-END DNAによるMu反応。2)自動キャピラリー電気泳動装置(ABI3100)による電気泳動法。3)コンピューター解析により標的遺伝子の点突然変異保有個体を検出方法。以上の結果、一つの標的遺伝子(10プライマーセット)を対象にラットミュータントアーカイブ5000をスクリーニングするのに、一ヶ月(約20日)で実施可能な高速スクリーニング方法(MuT-POWER)を開発することができた。(2)突然変異動物個体のメッセンジャーRNAスクリーニング標的遺伝子合成cDNAプローブとENU誘発突然変異個体由来メッセンジャーRNA (mRNA)をハイブリダイゼーションさせ、Mu反応により点突然変異遺伝子を同定する方法について検討した。ENU誘発突然変異個体から十分量のmRNAを抽出して、標的遺伝子cDNAプローブとハイブリダイゼーションさせ、Mu反応で検討したが、検出感度の限界のために未知の点突然変異を効率的に検出することができなかった。本mRNA法については、引き続き感度を上げるなどの検討が必要である。