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プロドラッグを利用した細胞除去システムの確立と応用

前药细胞去除体系的建立及应用

基本信息

批准号：
19657065
负责人：
川上厚志
金额：
$ 2.3万
依托单位：
Tokyo Institute of Technology
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2007
资助国家：
日本
起止时间：
2007 至 2008
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-19657065/
关键词：
発生・分化シグナル伝達小型魚類プロドラッグ

项目摘要

生体内の細胞または細胞集団の働きを解析しようとする場合、細胞を取り除く実験が有効な解析法となる。レーザーを用いて物理的に細胞を殺すと方法や、遺伝子工学的な方法によりトキシン遺伝子を発現させる方法などが行われてきたが、信頼性の高い簡便な方法は確立していないのが現状である。本研究ではニトロリダクターゼ酵素(NTR)とプロドラッグを利用して、細胞集団を発生中や発生後の任意の時期に除去できる新たな方法の構築と応用を検討した。H19-20年度の研究で、To12ベクターにNTRと蛍光タンパクとの融合遺伝子と、さらにプロモーターとしてefl alpha, eql (equinatoxin-like),dlx5a,junb, ilf2の5つの遺伝子の5'領域を組み込み、NTR融合遺伝子を発現するゼブラフィッシュ系統を作製した。プロモーターはいずれも再生中のひれの組織で発現増加が見られる遺伝子である。作製したトランスジェニックを用いて、プロドラッグmetronidazoleを水中に投与し、蛍光を発する細胞数の変化とアポトーシス、さらに再生阻害によって評価を行った。Tg(ilf2:NTR-EGFP)において、2-5mMのプロドラッグで蛍光の減少と再生阻害が見られたものの、その他については、期待したほどの十分な作用が検出できなかった。この理由は、1)5'上流域だけでは充分に強い遺伝子の発現をドライブできない、2)再生中組織は常に速い速度で細胞が供給され、細胞除去の効果が明瞭にならないなどの原因が考えられるが、本研究で構築したベクターと条件は、分化した細胞を標的としては充分に機能すると考えられ、今後、生体内の分化細胞を標的とした除去を試みていく。また、本年度は、遺伝子周囲を広く含むBACにEGFPとさらにTo12配列を組み込んだTO12-BACの作製も進めており、現在、系統の確立を進めている。

In vivo, there is an analytical method for the analysis of cell collection in vivo. In this paper, we use the method of physics, the method of sub-engineering, the method of physics, the method of sub-engineering, the method of physics, the method of engineering, the method of physics, the method of engineering, the method of physics, the method of physics, The purpose of this study is to use the method of enzyme enzyme (NTR) to remove the enzyme at any time after birth, and to use the new method to remove the enzyme at any time after birth. The H19-20 research, To12, NTR, optical and optical data fusion systems are designed to improve the performance of the system, such as efl alpha, eql (equinatoxin-like), dlx5a,junb, ilf2, 5 'domain, and NTR fusion. In the process of regeneration, the tissue is in the process of increasing the number of children. The purpose of this paper is to make sure that the metronidazole is used in the water, the number of cells in the water, the number of cells, and the number of cells. Tg (ilf2:NTR-EGFP), 2-5mM, and so on. This is the best way to reduce the damage caused by regeneration. The reasons are as follows: 1) in the upper watershed, 1) 5'in the upper watershed, there is an increase in the number of cells in the upper watershed. 2) in the process of regeneration, the tissue is supplied to the plant, the cells are removed, and the results show that they understand the causes of the disease, the conditions of this study, the conditions of the differentiation of the cells, and the mechanism of differentiation of the cells. In the future, the cells that differentiate into cells in vivo will be removed from the cells. For the first time, this year and this year, this week will include the allocation of BAC EGFP training To12 to ensure that the TO12-BAC will continue to improve. Now, the system will make sure that it is in operation.