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プロドラッグを利用した細胞除去システムの確立と応用

前药细胞去除体系的建立及应用

基本信息

批准号：
19657065
负责人：
川上厚志
金额：
$ 2.3万
依托单位：
Tokyo Institute of Technology
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2007
资助国家：
日本
起止时间：
2007 至 2008
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-19657065/
关键词：
発生・分化シグナル伝達小型魚類プロドラッグ

项目摘要

生体内の細胞または細胞集団の働きを解析しようとする場合、細胞を取り除く実験が有効な解析法となる。レーザーを用いて物理的に細胞を殺すと方法や、遺伝子工学的な方法によりトキシン遺伝子を発現させる方法などが行われてきたが、信頼性の高い簡便な方法は確立していないのが現状である。本研究ではニトロリダクターゼ酵素(NTR)とプロドラッグを利用して、細胞集団を発生中や発生後の任意の時期に除去できる新たな方法の構築と応用を検討した。H19-20年度の研究で、To12ベクターにNTRと蛍光タンパクとの融合遺伝子と、さらにプロモーターとしてefl alpha, eql (equinatoxin-like),dlx5a,junb, ilf2の5つの遺伝子の5'領域を組み込み、NTR融合遺伝子を発現するゼブラフィッシュ系統を作製した。プロモーターはいずれも再生中のひれの組織で発現増加が見られる遺伝子である。作製したトランスジェニックを用いて、プロドラッグmetronidazoleを水中に投与し、蛍光を発する細胞数の変化とアポトーシス、さらに再生阻害によって評価を行った。Tg(ilf2:NTR-EGFP)において、2-5mMのプロドラッグで蛍光の減少と再生阻害が見られたものの、その他については、期待したほどの十分な作用が検出できなかった。この理由は、1)5'上流域だけでは充分に強い遺伝子の発現をドライブできない、2)再生中組織は常に速い速度で細胞が供給され、細胞除去の効果が明瞭にならないなどの原因が考えられるが、本研究で構築したベクターと条件は、分化した細胞を標的としては充分に機能すると考えられ、今後、生体内の分化細胞を標的とした除去を試みていく。また、本年度は、遺伝子周囲を広く含むBACにEGFPとさらにTo12配列を組み込んだTO12-BACの作製も進めており、現在、系統の確立を進めている。

In the case of cell aggregation in living organisms, cell aggregation can be resolved by analytical methods. The method of cell biology and genetic engineering is to establish the status quo of cell biology and genetic engineering. In this study, we investigated the construction and application of novel methods for the development and removal of NTR and NTR in cell populations. H19-20 research, To12 years, NTR and NTR fusion gene development, today's development, efl alpha, eql (equinatoxin-like), dlx5a,junb, ilf2 and 5 years of NTR fusion gene development system. In the process of regeneration, the development of tissues increases. The number of cells in the water and the number of cells in the water can be reduced by using the metronidazole. Tg(ilf2:NTR-EGFP): 2 - 5 mM, 2-5mM, 2-5mM, 2-mM, 2 - 5 mM, 2-mM The reasons for this are: 1) the 5'upper basin is not sufficient for strong gene expression; 2) the regeneration of tissues is at a normal speed; the supply of cells; the effect of cell removal; the reasons for this; and 3) the construction of conditions for differentiation of cells; and 4) the sufficient function of cells. In vivo, differentiation cells are targeted for removal. This year's edition includes the BAC EGFP and the BAC 12-BAC system.